茶树cDNA文库的构建及新梢特异表达基因EST序列分析

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茶树cDNA文库的构建及新梢特异表达基因EST序列分析

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毕业论文范文题目：茶树cDNA文库的构建及新梢特异表达基因EST序列分析，论文范文关键词：茶树cDNA文库的构建及新梢特异表达基因EST序列分析
茶树cDNA文库的构建及新梢特异表达基因EST序列分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：茶树是一种重要的经济作物。茶叶是世界最流行的饮料之一，对人体有重要的生理保健作用。为了更好了解茶树新梢表达基因，并筛选出感兴趣的目的基因，本文构建了龙井43和安吉白茶等两个品种的新梢cDNA文库，并对龙井43文库进行较高通亮通量的EST测序和生物信息学分析。本研究获得的主要结果如下：1．以Trizol一步法从春茶新梢中提取总RNA，分离纯化富含PolyA的mRNA，LD-PCR反转录合成双链cDNA，以λTripEX2为载体，构建了龙井43新梢cDNA文库，。文库的滴度分别为6.8×10~5pfu／mL和4×10~5pfu／mL，符合高质量文库的要求，。文库的重组率为98.05％和96.15％（略..），且插入片段的长度在1.0-1.5kb左右，说明文库是完整的、有效的。两个文库总克隆数分别为3.5×10~5个和2.1×10~5个，高于所需标准。2．为了获得高质量的EST序列，利用原来λTrip1Ex2载体获得的质粒，在pUCM-T载体上引入2个SfiI酶切位点后，构建了一个新载体SfiI-pUC。用新载体构建一个用于测序的质粒文库。3．从龙井43新梢cDNA质粒文库中随机选取4320个克隆进行测序，根据EST标准获得长度大于200bp的有用序列为2963个，测序成功率为占总克隆的68.60％。通过DNATool软件进行冗余度分析后去除的重复序列有863个，占总获得序列的33.88％，获得有效ESTs1684个，其平均长度为478bp。4．所（本文此处忽略..）有有效序列与NCBI的核酸数据库比对，有36.0％序列(607EST)序列显示了与已知序列高度的同源性；而与蛋白质数据库进行比对时有71.3％的序列(1200EST)显示了与已知序列的高度的同源性，并建立了茶树新梢特异表达基因数据库。5．有效序列BlastX分析表明，丰度较高的基因(表达频率≥5)约有30个，约占总数的10％；中等丰度基因(表达频率在2-5之间)约100个，占总数的30％；其余低丰度的基因约占60％。说明在茶树新梢中基因大多数呈中低丰度表达。6．结合拟南芥功能基因分类标准，把通过BlastX比对获得茶树新梢有功能描述基因(包括功能确定的及推测功能的)分为12类，即能量代谢相关基因(Energy)，占功能基因总数的（本文此处忽略..）26.39％、蛋白质合成相关基因(Proteinsynthesis)占17.86％、细胞结构相关基因(Cellstructure)占10.71％、细胞抗性及防御相关基因(Diseaseanddefence)占9.23％、代谢相关基因(Metabolism)占8.33％、信号转导相关基因(Cellularsignaltransduction)占5.36％、细胞内运输相关基因(Cellulartransporters)占4.66％、转录相关基因(Transcription)占3.87％、细胞生长发育相关基因(Cellgrowthanddivision)占3.77％、次生代谢相关基因(Secondarymetabolism)占3.47％、蛋白质降解相（文章此处忽略..）关基因(Proteindestinationandstorage)占1.69％以及功能不明确基因及未分类的基因(Unclearclassificationandunclassified)占4.66％。

以上为本篇毕业论文范文茶树cDNA文库的构建及新梢特异表达基因EST序列分析的介绍部分。

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