Cyclin E2在白血病中的表达及其反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖的调控作用

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Cyclin E2在白血病中的表达及其反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖的调控作用

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毕业论文范文题目：Cyclin E2在白血病中的表达及其反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖的调控作用，论文范文关键词：Cyclin E2在白血病中的表达及其反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖的调控作用
Cyclin E2在白血病中的表达及其反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖的调控作用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:几乎所有的cyclins都可能作为一种原癌基因被激活后在肿瘤中发挥癌基因的作用。CyclinE2作为cyclin家族新发现的成员之一,是基因编码一个与cyclinE1高度同源的404个氨基酸残基的蛋白质。CyclinE2/CDK2复合体相关的激酶活性受到细胞周期的调节,在G1/S期转化时达到峰值。在哺乳动物cyclinE2的过表达加速G1期进程,表明cyclinE2可能在G1期起限制点作用。CyclinE1主要在大多数增殖性正常细胞和致肿瘤性转化细胞中表达,而cyclinE2的水平在非转化的细胞中几乎难以检测到,在肿瘤源性细胞中显著升高。目前国内外部分学者研究已经证明cyclinE2在多种实体肿瘤组织中(如肺癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、脑癌等)高表达。关于cyclinE2在白血病患者中的表达及其作用国内外的报道不多,我们的前期试验发现cyclinE2在白血病细胞中有高表达并且与临床疗效有明显的负相关性,是白血病细胞增殖的一种新的指标,可能对判断预后有帮助。故此希望通过进一步实验明确cyclinE2在白血病发病过程中所起的作用,以及与CDK2的关系,了解其表达异常与白血病患者的分型、分期及预后(复发、耐药、缓解)的关系;希望为临床诊断、化疗药物的选择及判断预后提供帮助。反义核酸技术是利用反义核酸片段抑制或封闭目的基因的表达,达到基因导向（本文此处忽略..）治疗肿瘤的目的。CyclinE2在白血病细胞中有高表达且和临床预后相关,我们的实验设计一个特异的cyclinE2反义脱氧寡核苷酸(antisenseoligodexynucleotide,ASON)封闭cyclinE2的表达,探讨cyclinE2ASON对体外培养的白血病细胞增殖、凋亡的调控作用,并用脂质体转染提高细胞内摄取反义核酸的浓度,从分子水平揭示cyclinE2对白血病细胞恶性增殖的作用,希望为白血病的基因治疗提供一个新的思路。方法:本研究的研究对象包括70例急性白血病患者(包括41例新近诊断急性白血病患者、10例复发患者和19例完全缓解期患者)。14名健康人为正常对照。应用半定量RT-PCR方法检测骨髓或外周血单个核细胞cyclinE2和CDK2mRNA表达水平。采用反义技术将cyclinE2特异的ASON与K562细胞共培养。用MTT法检测转染ASON和脂质体lipofectamineTM2000后的细胞活力,RT-PCR方法检测转染细胞cyclinE2mRNA表达水平及流式细胞术和形态学观察检测细胞凋亡。结果:1.CyclinE2和CDK2mRNA在AL中的表达水平:41例初治AL患者组cyclinE2mRNA阳性表达率为70.7%,表达水平为(M=51),正常对照组不表达,AL组阳性率和表达水平明显高于正常对照组(P0.01,P0.05)。急性髓系白血病(AML)患者组(71%,M=32.63)与急性淋巴细胞（本文此处忽略..）白血病(ALL)患者组(70%,M=33.95)差别无统计学意义(P0.05),两组表达水平均高于正常对照组(P值均小于0.01)。复发难治组阳性表达率为70%,表达水平(M=53.6)高于正常对照组(P0.05),差别有统计学意义,与初治组和CR组差别无统计学意义(P0.05)。完全缓解组阳性表达率和表达水平为(47.4%,M=34.89)低于初治AL组(P0.01,P0.05),差别有统计学意义,高于正常对照组,差别无统计学意义(P0.05)。在41例AL患者初治组CDK2mRNA阳性表达率78.1%,表达水平为(M=53.83),明显高于正常对照组(28.6%,M=20.79),(P0.01,P0.05)。复发难治组阳性表达率为60%,表达水平(M=39.95),明显高于正常对照组(P0.01,P0.05),与AL初治组和CR组差别无统计学意义(P0.05)。完全缓解组阳性表达率为63.2%,表达水平为(M=36.37)低于AL初治组(P0.05),差别有统计学意义,与正常对照组差别无统计学意义(P0.05)。2.对41例新近诊断AL患者进行疗效评估,29例cyclinE2mRNA阳性表达患者中14例获完全缓解,完全缓解率48.3%;12例cyclinE2mRNA阴性表达患者中11例获完全缓解,完全缓解率91.7%,进行卡方检验分析,两组缓解率差别有统计学意义(χ2=5.016,P0.05)。对临床缓解患者进行随访,发现cyclinE2阳性患者复发率高,但差别无统计学意义(P0.05)。3.Pearson相关分析表明在70例AL患者中cyclinE2mRNA表达水平与CDK2mRNA表达水平呈正相关(r=0.5097,P0.01)。在41例初治AL患者中cyclin（文章此处忽略..）E2和CDK2双阳性患者23例,双阳性率为56.1%,其中CR9例,缓解率为38.1%;cyclinE2和CDK2双阴性患者8例,CR7例,缓解率为87.5%。,cyclinE2和CDK2双阳性患者缓解率低于cyclinE2和CDK2双阴性患者(P0.05)。4.CyclinE2特异的ASON组与SON组、RandomASON组及空白对照组相比,能显著地抑制cyclinE2mRNA水平的表达(P0.01);白血病细胞的生长明显受抑制(P0.01),细胞凋亡明显增加。结果表明反义脱氧寡核苷酸能有效地抑制K562细胞的增殖,抑制K562细胞cyclinE2mRNA表达上调,并显著地诱导细胞凋亡。结论:1.AL初治组和复发组患者cyclinE2和CDK2mRNA的表达水平明显高于正常对照组,初治组表达水平明显高于完全缓解组。复发组表达水平高于正常对照组,但与初治组、缓解组均无统计学差异。提示cyclinE2和CDK2在AL中过度表达,导致细胞周期调节失控而异常增生,促进肿瘤的发生和发展2.评估AL疗效发现:cyclinE2mRNA阳性表达组其完全缓解率低于cyclinE2阴性表达组,cyclinE2阳性表达的患者治疗效果差。CyclinE2可以作为判断急性白血病预后的指标。3.在AL中cyclinE2/CDK2mRNA的表达水平明显升高,且呈正相关。CyclinE2/CDK2双表达患者CR低,治疗效果差。提示cyclinE2和CDK2在A（此处忽略..）L的发病机制中起协同作用,共同参与了急性白血病的发生与发展。CyclinE2/CDK2双表达者的白血病细胞恶性程度高,细胞增殖旺盛。4.脂质体转染cyclinE2的反义寡核苷酸能够有效地抑制K562细胞cyclinE2mRNA的表达,同时,对白血病细胞株K562的生长有明显的抑制作用,并可诱导K562细胞凋亡。提示cyclinE2在细胞周期调控中起作用,cyclinE2基因有望作为反义技术治疗急性白血病中的一个较有意义的新靶点。

以上为本篇毕业论文范文Cyclin E2在白血病中的表达及其反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖的调控作用的介绍部分。

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