库尔勒香梨主要病毒分子检测试剂盒的研制及应用

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库尔勒香梨主要病毒分子检测试剂盒的研制及应用

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毕业论文范文题目：库尔勒香梨主要病毒分子检测试剂盒的研制及应用，论文范文关键词：库尔勒香梨主要病毒分子检测试剂盒的研制及应用
库尔勒香梨主要病毒分子检测试剂盒的研制及应用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：病毒病是果树主要病害之一。随着果树面积的不断扩大和栽培时间的延长,病毒的危害越来越明显,已引起广大科技人员重视,无病毒化生产是防治病毒的主要措施。果树无毒化生产要求一种准确、灵敏、简便、快速的病毒检测方法,传统的木本指示植物检测准确可靠,但耗时长;而血清法检测的抗血清制备难度大、价格昂贵。因此为满足果树苗木检疫和无毒化生产的需要,摸索一种准确、灵敏、快速、简便的检测方法十分必要。近年来分子检测技术为果树（文章此处忽略..）病毒的检测提供了新的有力工具。新疆库尔勒香梨因其独特的风味品质而受到广大消费者的喜爱,是新疆出口创汇的主要产品之一。但近年来,发现新疆库尔勒香梨普遍带有病毒,给新疆的香梨的发展带来巨大的隐患,因此,开展新疆香梨病毒分子检测研究具有十分重要的理论和实际意义。本研究主要包括库尔勒香梨主要病毒RT—PCR检测技术、cDNA探针检测技术、试剂盒的组装及对样品的检测。1.获得了适合于香梨树各组织(花、芽、叶、皮层)总R（文章此处忽略..）NA的提取方法,所提取的总RNA可很好地用于RT—PCR研究和核斑点杂交的周年检测。2.根据ACLSV、ASPV两种病毒基因组序列分别设计相应引物,扩增出683bp、361bp保守特异性片段用于RT—PCR、NASH。序列比较其核苷酸相似性分别为83.75%、79.5%。3.优化了香梨病毒的RT—PCR检测方法,结果表明:RT体系中各药剂的终浓度为RNasin1.25U/μL互补引物0.500μmol/L、dNTPs1.0mmol/L、AMV1U/μL,P（本文此处忽略..）CR体系中各药剂的终浓度为MgCl_21.5mmol/L,dNTPs0.20mmol/L,引物浓度1.0μmol/L,TaqE浓度0.1U/μL时;可以获得很强的特异性带。4.利用克隆后提取的质粒进行生物素标记cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究,结果表明:探针浓度为400ng/ml(ACLSV),甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应6小时,可获得最高灵敏度,进口硝酸纤维素膜的灵敏度最好。Tween20封闭效果比3%牛血清白蛋（文章此处忽略..）白的好。针对常规核酸杂交过程长,操作复杂的问题,较大的改进了杂交程序,使一个检测周期从22h缩减至5h,提高了病毒NASH的检测效率。5.组装了基于RT—PCR检测体系的试剂盒和基于生物素标记cDNA探针的优化杂交检测试剂盒。通过检测样品表明:该试剂盒具有高效、快速、准确、稳定的优点。

以上为本篇毕业论文范文库尔勒香梨主要病毒分子检测试剂盒的研制及应用的介绍部分。

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