查尔酮合酶基因cDNA的克隆及对茑萝的遗传转化

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查尔酮合酶基因cDNA的克隆及对茑萝的遗传转化

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毕业论文范文题目：查尔酮合酶基因cDNA的克隆及对茑萝的遗传转化，论文范文关键词：查尔酮合酶基因cDNA的克隆及对茑萝的遗传转化
查尔酮合酶基因cDNA的克隆及对茑萝的遗传转化毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：查尔酮合酶(Chalconesynthase，CHS)是类黄酮合成途径中的一个关键酶。CHS表达量的增加或减少都可能导致植物花色的变异。本实验利用RT-PCR方法克隆查尔酮合酶基因(CHS)的cDNA，通过两步的克隆，构建在植物中表达CHS的植物双元表达载体p1301BΩC。并以农杆菌介导将CHS导入茑萝中，初步建立了茑萝的遗传转化系统，为今后茑萝遗传（本文此处忽略..）改良的进一步研究奠定基础。主要结果如下：(1)以即将开放的中国水仙的花蕾为材料，采用异硫氰酸胍-苯酚-氯仿法提取RNA，反转录成cDNA后用特异引物PCR扩增出1．2kb左右的片段。核酸序列分析表明，该片段的编码区长1167bp，编码389个氨基酸。与已知的植物CHS核苷酸同源率均达80％以上，氨基酸同源率高达85％。实验结果证明该片段即为中国水仙的CHScDNA。(2)为（本文此处忽略..）了能在在植物中表达(CHS，通过一步的中间克隆，将CHS连上Camv35s启动子和nos终止子。进一步将重组片段插入植物表达载体pCAMBIA1301，酶切及测序结果都证明植物双元表达载体p1301BΩC构建获得成功。(3)建立了茑萝的基因转化受体系统。在没有前人的工作基础上，摸索了茑萝脱分化和分化的条件。实验认为茑萝子叶愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA0．5mg／L（略..）+2,4-D2mg／L，胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA1mg/L+NAA0．5mg／L。愈伤组织分化培养基为MS+6-BA2mg/L。(4)初步建立了农杆菌介导的茑萝遗传转化体系。实验结果表明叶盘法不适合茑萝的遗传转化。而GUS检测表明茑萝的疏松愈伤组织有较高的遗传转化率。为了进一步验证茑萝的转化，进行了分子检测实验。以载体T-DNA上的一段DNA设计（此处忽略..）一个引物，以CHS上的一段DNA为另一个引物，进行PCR检测。同时，还以DIG标记的Camv35s上的一段为探针进行Southern点杂交和PCR-Southern杂交。二者都进一步证实了CHS基因已整合到茑萝基因组中。

以上为本篇毕业论文范文查尔酮合酶基因cDNA的克隆及对茑萝的遗传转化的介绍部分。

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