端粒酶抑制剂对肝癌、鼻咽癌细胞株作用的研究

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端粒酶抑制剂对肝癌、鼻咽癌细胞株作用的研究

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毕业论文范文题目：端粒酶抑制剂对肝癌、鼻咽癌细胞株作用的研究，论文范文关键词：端粒酶抑制剂对肝癌、鼻咽癌细胞株作用的研究
端粒酶抑制剂对肝癌、鼻咽癌细胞株作用的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:端粒酶是一种具有逆转录酶活性的核糖核蛋白酶,它能以自身RNA为模板,合成端粒DNA序列。其结构和行为的异常被认为与细胞衰老及肿瘤发生发展有密切关系。大量资料证实,85%以上的人类肿瘤细胞存在高水平的端粒酶活性,而绝大多数体细胞和良性肿瘤细胞缺乏端粒酶活性。因此,多数学者认为,通过抑制端粒酶活性能有效的抑制某些肿瘤的增殖,从而获得有用的肿瘤生物标记和治疗靶点。于是从二十世纪九十年代开始,国内外学者提出了许多以抑制端粒酶为目标的肿瘤基因治疗策略,期望能开发出抑制端粒酶活性或基因表达的抑制剂,达到治愈肿瘤的目的。肝癌、鼻咽癌为广西的高发肿瘤,常规的化疗和放疗治疗,常因耐药问题及较大的毒副作用而影响疗效。积极探索毒副作用小的新型生物治疗方法,是生物医药工作者孜孜不倦地追求目标。端粒酶的发现及其研究的新进展,为肝癌、鼻咽癌的生物治疗提供一种全新的思路。为此,本研究通过多种端粒酶抑制剂同时作用于人肝癌细胞SMMC-7721和人鼻咽癌（此处忽略..）细胞LXC,比较各种端粒酶抑制剂抑制癌细胞端粒酶活性的效果,探讨其抑制端粒酶活性的可能机制,为端粒酶抑制剂的临床应用提供理论依据。方法:1、将端粒酶TRAP法与定量PCR法结合起来,利用荧光染料SYBR-GreenI建立一种新的端粒酶活性检测方法:FQ-TRAP法。2、培养肿瘤细胞到对数生长期,按处理因素ASODN、HASODN、NODN、HNODN、EGCG、AZT、ADM、ATRA分为九组,对照组未加任何处理因素。各处理因素以不同的浓度作用于肿瘤细胞,以MTT法试验首先观察各处理因素抑制肿瘤细胞生长的情况,确定各处理因素的最佳作用时间和浓度。3、利用FQ-TRAP法检测端粒酶抑制剂作用后肿瘤细胞端粒酶活性变化。4、用TUNEL法和流式细胞术检测端粒酶抑制剂作用后肿瘤细胞凋亡过程中形态学及其他的变化。5、利用单细胞激光拉曼光谱技术从细胞的分子水平上分析端粒酶抑制剂作用后肿瘤细胞中大分子结构的变化。论文:端粒酶抑制剂对肝癌（略..）、鼻咽癌细胞株作用的研究中文摘要3结果:1、利用FQ-TRAP法检测肝癌、鼻咽癌细胞的端粒酶活性,可检测到102个细胞的酶活性,特异度和灵敏度高、重复性好。2、MTT试验观察到,不同浓度端粒酶抑制剂分别与两种肿瘤细胞共同孵育,随着抑制剂作用浓度增加、作用时间的延长,肿瘤细胞存活率逐步降低。除NODN外,各端粒酶抑制剂均能抑制癌细胞的生长。ASODN、HSODN、HNODN、EGCG、AZT、ADM、ATRA分别作用SMMC-7721细胞48小时后,细胞生长抑制率分别为:54.2%,58.40%,47.40%,60.00%,50.00%,50.00%和54.40%,抑制细胞的最佳作用浓度分别为:6μmol/L,5μmol/L,5μmol/L,125mg/L,20mmol/L,1mg/L和10μmol/L。各种端粒酶抑制剂对鼻咽癌LXC细胞的抑制作用依次为:ASODN(54.52%)、NODN(24.6%)、HSODN(56.52%)、HNODN(40.29%)、EGCG(54.87%)、AZT(51.31%)、ADM(56.31%)、ATRA(54.61%),各抑制剂作用的最佳作用浓度分别为:ASODN(6μmol/L),HSODN(5μmol（略..）/L),NODN(6μmol/L),HNODN(5μmol/L),EGCG(250mg/L),AZT(10mmol/L),ADM(2.5mg/L),ATRA(10μmol/L)。各种端粒酶抑制剂对肿瘤细胞的最佳作用时间为48小时。3、利用FQ-TRAP法检测各类端粒酶抑制剂作用后,肝癌、鼻咽癌细胞端粒酶活性的变化,发现除ASODN、NODN对鼻咽癌细胞的端粒酶活性没有抑制作用外,其余端粒酶抑制剂作用后癌细胞端粒酶活性都有变化,其中肝癌细胞中以ASODN,EGCG,AZT抑制效果较明显,而鼻咽癌细胞中以AZT,ATRA抑制作用较强。4、细胞凋亡检测:①TUNEL法观察各类端粒酶抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡情况,除对照组外,发现肝癌细胞各组均出现凋亡现象,其中以EGCG,AZT诱导凋亡最明显;鼻咽癌细胞各组也均出现凋亡现象。②流式细胞术检测发现,各类端粒酶抑制剂均能诱导癌细胞凋亡,但总体凋亡率较低,且两种癌细胞发生凋亡的情况不一致,其中肝癌SMMC-7721细胞以EGCG,AZT及HN（文章此处忽略..）ODN诱导凋亡作用最明显,凋亡率分别为42.2%,13.5%,10.3%;而鼻咽癌细胞中以HSODN诱导凋亡作用相对较明显,凋亡率为14.4%。5、单细胞激光拉曼光谱检测结果显示,端粒酶抑制剂作用后,两类癌细胞内的核酸、蛋白质、脂类都有不同程度的变化,肝癌细胞在782cm-1,1004cm-1,1076cm-1,1445cm-1等附近的拉曼光谱的相对强度,与对照比较存在差异。鼻咽癌细胞在715cm-1,869cm-1,1127cm-1,1174cm-1,1085cm-1,1257cm-1,

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