基于核酸适配体的凝血酶检测新方法研究

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基于核酸适配体的凝血酶检测新方法研究

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毕业论文范文题目：基于核酸适配体的凝血酶检测新方法研究，论文范文关键词：基于核酸适配体的凝血酶检测新方法研究
基于核酸适配体的凝血酶检测新方法研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：第一章：简要介绍了蛋白质检测的意义和常用方法,以及核酸适配体的定义和特点；综述了基于适配体的蛋白质检测方法和纳米材料在其中的应用；阐述了本论文的立题背景、主要研究内容及创新点。第二章：采用荧光基团标记的适配体作为探针,金纳米颗粒作为荧光猝灭剂,建立了一种检测凝血酶的荧光分析法。将荧光染料分子标记的含29个碱基的可识别凝血酶的DNA适配体非特异吸附到纳米金表面,荧光发生猝灭,加入凝血酶后,凝血酶与适配体特异性结合,使适配体空间构象发生改变,荧光染料分子远离（本文此处忽略..）纳米金表面,荧光恢复,从而可以实现对凝血酶的检测。实验结果表明,这种检测方法简便、快速、特异性强,检出限为0.54nM(对应样品体积为200μL)。第三章：利用适配体的亲和作用,磁珠的预富集功能以及量子点的荧光特性,发展了一种基于适配体检测凝血酶的三明治夹心式分析方法。采用两种可与凝血酶分子不同作用位点结合的适配体(15-merApt15;29-merApt29),将其中一种适配体修饰于磁珠表面作为捕获适配体,另一种适配体修饰于量子点表面作为信号报告适配体,凝血酶存在时可以形成三明治夹（文章此处忽略..）心复合物,通过检测三明治复合物中量子点的荧光信号可实现对凝血酶的检测。实验考察了捕获适配体和信号报告适配体的选择及适配体修饰的磁珠或量子点的加入顺序对方法检测性能的影响。在优化的实验条件下,实现了对凝血酶的灵敏检测。血红蛋白、溶菌酶和转铁蛋白均不干扰两种方法对凝血酶的检测,表明方法具有很好的选择性。第四章：基于适配体的亲和性捕获和随后的酶促反应,发展了一种简单的凝血酶比色分析法。凝血酶被适配体修饰的磁珠捕获后,催化生色底物(T3068,序列为β-Ala-Gly（本文此处忽略..）-Arg-p-nitroanilide)转化为吸收光度法可检测的产物。使用吸收光度计测定生成的产物可以最终定量检测凝血酶。利用样品富集和酶催化放大,实现了对凝血酶的高灵敏检测,而适配体的选择性结合和酶的特异性反应使方法具有高特异性。当酶促反应时间为24h,分析250μL凝血酶样品时,方法检出限为2pM。第五章：本章采用与第四章类似的检测原理,使用凝血酶的另一种生色底物(T1637,序列为N-P-tosyl-Gly-Pro-Arg-p-nitroanilide)进一步提高了方法（本文此处忽略..）的灵敏度。凝血酶被适配体修饰的磁珠捕获后,催化生色底物T1637转化为光度法可检测的产物。由于底物T1637的转换数是底物T3068的100倍,因此相同条件下T1637参与酶反应具有更高的反应速率。当酶促反应时间为24h,分析250μL凝血酶样品时,方法检出限为40fM,与采用底物T3068得到的结果相比,降低了近50倍。该方法可以用于稀释人血清样品中凝血酶的检测。

以上为本篇毕业论文范文基于核酸适配体的凝血酶检测新方法研究的介绍部分。

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