猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性抗原表位重组腺病毒的构建及鉴定

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猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性抗原表位重组腺病毒的构建及鉴定

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毕业论文范文题目：猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性抗原表位重组腺病毒的构建及鉴定，论文范文关键词：猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性抗原表位重组腺病毒的构建及鉴定
猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性抗原表位重组腺病毒的构建及鉴定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪圆环病毒2型(PorcineCircovirustype2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征及圆环病毒相关疾病(Porcinecircovirus-associateddisease,PCVAD)的主要病原体。PCV2的Cap蛋白基因(ORF2)包含有两个重要的抗原表位,是编码区别PCV1和PCV2的主要特异性蛋白的重要区域,并且编码蛋白具有良好的抗原性。本研究利用PC（文章此处忽略..）R技术扩增出Cap蛋白基因上包含两个特异性抗原表位的片段,并进行了克隆、重组构建,成功实现了Cap蛋白基因在腺病毒中的表达,并对表达蛋白进行了鉴定。根据Genbank公布的PCV2ORF2基因序列设计一对引物,在上下游引物中分别加入KpnI和HindⅢ酶切位点,从感染有PCV2的PK-15细胞中扩增包括两个特异性表位的ORF2目的基因片段,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,（略..）出现一条约276bp的条带,将其回收克隆到腺病毒5型穿梭质粒pShuttle-CMV载体上并测序,经BLAST软件比对,KpnI和HindⅢ酶切及PCR鉴定,结果与预期一致,阳性重组穿梭质粒命名为rpShuttle-CMV-276。先把骨架质粒pAdeasy-1用化学方法转化入BJ5183感受态工程菌中,阳性命名为BJ5183/p,氨苄青霉素培养基筛选出该菌,再将其用化学方法做成感受态（略..）菌。PmeⅠ酶切rpShuttle-CMV-276重组质粒,使其线性化并去磷酸化后用化学方法转化到BJ5183/p感受态菌中,使两种质粒在BJ5183发生同源重组,经PCR、测序及PacⅠ酶切鉴定获得了阳性质粒,命名为rPAD-276。碱裂解法抽提阳性质粒经PacⅠ酶切纯化后转染HEK-293A细胞,在其中包装出重组腺病毒。通过PCR、IPMA、免疫荧光及小鼠试验检测证明PCV2的特异性C（本文此处忽略..）ap蛋白基因在HEK-293A中获得了表达并具有很好的抗原特性。本研究成功包装出了含有猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性抗原表位重组腺病毒并获得了成功表达,为进一步研究PCV2腺病毒活载体基因工程苗、单克隆抗体及检测试纸条的制备奠定了坚实的基础。

以上为本篇毕业论文范文猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性抗原表位重组腺病毒的构建及鉴定的介绍部分。

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