MCPH1 shRNA逆转录病毒载体构建及其稳定表达的宫颈癌CaSki细胞系

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MCPH1 shRNA逆转录病毒载体构建及其稳定表达的宫颈癌CaSki细胞系

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毕业论文范文题目：MCPH1 shRNA逆转录病毒载体构建及其稳定表达的宫颈癌CaSki细胞系，论文范文关键词：MCPH1 shRNA逆转录病毒载体构建及其稳定表达的宫颈癌CaSki细胞系
MCPH1 shRNA逆转录病毒载体构建及其稳定表达的宫颈癌CaSki细胞系毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：子宫颈癌(cervicalcancer,CC)是女性常见的恶性肿瘤之一,居我国女性肿瘤第一位,每年新发现的病例为13.15万,近年来年轻妇女患宫颈癌的越来越多,已由20世纪50年代的9%上升到现在的24%。所以关于宫颈癌的研究越来越引起人们的重视。近年来,随着人们对宫颈癌病因及分子机制等研究的深入,分子生物学技术的发展,宫颈癌的治疗有了一种新策略。研究者们提出可以将目的基因用基因转移技术导入靶细胞,在分子水平上阻断宫颈癌的发生发展。此方法具有治疗特异性强、效果显著、基本不损伤正常组织的优点,是一项非常有（本文此处忽略..）前景的宫颈癌治疗方案。本研究拟使用逆转录病毒介导的MCPH1shRNA建立RNA干扰表达体系,并观察其在宫颈癌CaSki细胞中对MCPH1表达的影响,为宫颈癌基因治疗的深入研究奠定必要的实验基础。研究方法:1.MCPH1siRNA有效序列的筛选。设计siRNA序列,人工化学合成后,用RNAiMax将其转入宫颈癌CaSki细胞中,①利用RT-PCR技术检测处理后细胞中MCPH1mRNA的表达情况。②使用Western-blotting技术检测处理后细胞中MCPH1蛋白的表达情况。2.逆转录（略..）病毒载体的构建及鉴定。根据筛选出的有效siRNA序列,设计并合成shRNA双链DNA片段,将该片段重组到逆转录病毒质粒pSUPERRetro中,进行测序分析鉴定,构建携带人MCPH1基因RNA干扰的逆转录病毒载体pSUPER-shRNA-MCPH1。3.稳定表达的宫颈癌CaSki细胞系的建立。①用PT67细胞包装构建好的逆转录病毒载体。②使用产生的重组逆转录病毒感染宫颈癌细胞株CaSki细胞,用puromycin筛选产生稳定的细胞克隆。③用RT-PCR与realtimePCR技术检测（此处忽略..）细胞中MCPH1mRNA表达的变化。④用Western-Blotting技术检测细胞中MCPH1蛋白表达的变化。实验结果:1.设计出两条siRNA的序列,转入细胞72h后提取总RNA和蛋白,经RT-PCR及Western-blot技术发现MCPH1的表达均受到抑制。其中1号序列的干扰效果最为明显。2.成功构建重组逆转录病毒质粒,经测序鉴定正确。3.成功包装出逆转录病毒,感染CaSki细胞后用puromycin筛选出稳定的单细胞克隆;RT-PCR,realtimePCR和Western-Blo（略..）tting检测人MCPH1mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和正常对照组。结论:1.成功筛选出有效的siRNA序列。2.成功构建逆转录病毒载体pSUPER-shRNA-MCPH1,并包装出逆转录病毒,感染CaSki细胞,建立了稳定的细胞系。在该细胞系中,MCPH1基因的mRNA和蛋白水平明显下降,说明构建MCPH1的RNA干扰体系初步成功,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础。

以上为本篇毕业论文范文MCPH1 shRNA逆转录病毒载体构建及其稳定表达的宫颈癌CaSki细胞系的介绍部分。

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