AVM诱导王鸽脑神经细胞凋亡的线粒体通路研究

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AVM诱导王鸽脑神经细胞凋亡的线粒体通路研究

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毕业论文范文题目：AVM诱导王鸽脑神经细胞凋亡的线粒体通路研究，论文范文关键词：AVM诱导王鸽脑神经细胞凋亡的线粒体通路研究
AVM诱导王鸽脑神经细胞凋亡的线粒体通路研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：阿维菌素(avermectin,AVM)是农业和畜牧业中大量应用的具有潜在环境毒性的农畜两用杀虫剂,目前已被认为是抗蠕虫药物中环境毒性最为严重的药物之一。以往研究表明AVM能引起中毒动物运动失调,脑组织出血和水肿以及脑神经细胞凋亡等变化,但尚未见到深入系统的研究,对于神经细胞凋亡途径的研究也较少,AVM诱导体外培养神经细胞线粒体凋亡途径的研究尚未见报道。鉴于鸽子为环境监测推荐的试验动物,本课题以体外培养王鸽脑神经细胞为研究对象,进行2.5μg·L~(-1)、5μg·L~(-1)、10μg·L~(-1)三种不同剂量AVM的染毒处理,通过对王鸽脑神经细胞的存活率、细胞的形态学变化、生化特征变化、LDH漏出率、NO（略..）产生量;线粒体活性、线粒体膜电位、线粒体氧化应激、细胞内游离钙离子浓度及细胞内CaMmRNA表达、细胞内Caspase酶活性以及Caspase-3mRNA表达等凋亡影响因素的观察,探讨了AVM对神经细胞毒性作用的剂量效应关系,以阐述AVM对神经细胞影响的线粒体机制。研究结果表明:1.应用AO-EB双荧光染色、HE染色、透射电镜以及Tunel法,观察培养液中添加三种不同剂量AVM对神经细胞毒性作用,从形态学角度证实AVM能够引发神经细胞凋亡,且神经细胞凋亡指数与培养液中添加AVM的剂量呈正相关。2.应用琼脂糖凝胶电泳、酶标仪、流式细胞术等方法,观察培养液中添加三种不同剂量AVM对神经细（文章此处忽略..）胞的DNA损伤以及磷脂酰丝氨酸(PS)的影响情况,从生化特征角度证实了AVM能够引发神经细胞凋亡,神经细胞的膜对称性消失,且影响程度与培养液中添加AVM剂量有关。3.通过检测神经细胞的LDH漏出率和NO产生量,证实AVM能引起神经细胞的膜通透性增加,NO产生量减少。4.采用四唑盐比色法(MTT法)观察AVM对神经细胞的线粒体活性的影响,结果表明培养液中添加三种不同剂量AVM均能使神经细胞线粒体活性降低,且神经细胞线粒体活性变化与培养液中添加AVM的剂量呈正相关,证实AVM能损伤神经细胞的线粒体。5.应用流式细胞术观察线粒体膜电位和细胞内活性氧(ROS)的产生情况,结果显示培养液中添加三种不同剂量（略..）AVM均能引起神经细胞氧化应激,线粒体膜电位下降,证实AVM通过氧化应激损伤线粒体介导细胞凋亡。6.应用半定量RT-PCR法和比色法检测Caspase-3mRNA表达水平和Caspase-3、8、9活性,结果显示AVM能够引起细胞内Caspase-3mRNA表达水平上升,Caspase-3活性增加,Caspase-9活性也增加,Caspase-8在AVM浓度为2.5μg·L~(-1)时活性增强,其它剂量组变化不明显,证实AVM可通过线粒体途径激活Caspase酶系统导致神经细胞凋亡。7.应用半定量RT-PCR法和荧光探针法检测细胞内CaMmRNA表达水平和游离钙离子浓度,结果表明AVM能够引起鸽神经细胞内C（略..）aMmRNA表达水平下降,游离钙离子浓度升高,干扰细胞钙离子的转运,导致细胞钙稳态失衡,证实AVM能通过影响细胞内钙稳态损伤线粒体介导细胞凋亡。本试验从细胞毒性、细胞凋亡、氧化应激、线粒体膜电位、线粒体活性、钙稳态以及凋亡蛋白酶等角度入手,在细胞形态,生化特征和分子水平上阐明了AVM毒性作用的线粒体机制,为揭示AVM中毒的发病机制提供新的思路和见解,在充实AVM生态毒理学资料的同时,也为进一步深入研究AVM对生物影响提供有价值的线索,并为保护生态环境和合理应用阿维菌素类药物提供科学依据。

以上为本篇毕业论文范文AVM诱导王鸽脑神经细胞凋亡的线粒体通路研究的介绍部分。

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