根癌农杆菌介导产甘油假丝酵母转化研究

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根癌农杆菌介导产甘油假丝酵母转化研究

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毕业论文范文题目：根癌农杆菌介导产甘油假丝酵母转化研究，论文范文关键词：根癌农杆菌介导产甘油假丝酵母转化研究
根癌农杆菌介导产甘油假丝酵母转化研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：甘油是一种重要的轻化工原料,已广泛应用于化妆品、牙膏、烟草、香精、水性油墨、印染纺织、涂料、合成树脂、皮革、造纸、制药、食品和国防等十多个领域的1700多种产品。耐高渗酵母——产甘油假丝酵母是本研究室拥有自主知识产权的甘油生产菌株,其发酵生产甘油具有高产量、高转化率和高回收率等优点,在我国得到了较好的工业化应用。近些年来,利用基因工程菌生产甘油越来越引起人们的关注。采用基因工程手段构建重组菌可以对产甘油假丝酵母代谢途径进行有目的的改造,进一步改进产甘油假丝酵母的性能,以（本文此处忽略..）达到提高甘油产量和改善工艺的目的。实现这一目标首先要获得有效的转化方法。本研究首先通过构建质粒pCAM3300-URA3将其转化根癌农杆菌。利用URA3基因缺陷互补为筛选标记,尝试采用根癌农杆菌介导的方法转化酿酒酵母,取得了成功。在转化酿酒酵母成功的基础上,本研究通过构建质粒pCAM3300-Zeocin,将其电击转化根癌农杆菌。通过将含有目的质粒pCAM3300-Zeocin的根癌农杆菌和产甘油假丝酵母共培养,利用Zeocin抗性基因为筛选标记,实现了pCAM3300-Zeocin对产甘油假丝酵（此处忽略..）母的转化。在研究中根据根癌农杆菌的生长特性,对转化条件进行了优化,在共培养时间为24h,细胞比例为1:500-1000时最高转化率达到2个转化子/104个酵母细胞。初步建立了根癌农杆菌介导转化产甘油假丝酵母的转化方法为进一步研究产甘油假丝酵母打下基础。利用PCR技术从酿酒酵母中扩增其全长产甘油关键酶3-磷酸甘油脱氢酶基因(glycerol3-phosphatedehydro-genasegene,GPD1),构建质粒pCAM3300-Zeocin-GPD1并将其转化根癌农杆菌。首次利用根癌农杆菌介导转化系统将（此处忽略..）酿酒酵母GPD1全长基因转入产甘油假丝酵母,在zeocin抗性平皿上挑取阳性转化子。对得到的阳性转化子进行筛选,得到一株在含有玉米浆5g/L、尿素2g/L、葡萄糖250g/L的培养基中30℃、200r/min的条件下发酵80h甘油产量可提高12.93%的转化子,将其命名为Candidaglycerinogenes-GPD1-10(C.g-G10)。C.g-G10在菌体生长平衡期甘油积累速率比C.g提高了71.7%,Gpd1p酶活力提高了22.33%;伴随甘油积累速率和Gpd1p酶活力的提高,C.g-G10耗糖速率相比提高了36.92%,发酵时间缩短了（略..）将近24h。这说明通过根癌农杆菌介导转化GPD1全长基因转入产甘油假丝酵母并进行了有效的表达。研究表明GPD1全长基因的插入并没有改变C.g-G10的菌体生长过程和对磷源的适应性状。对C.g-G10传代稳定性进行了研究,结果表明C.g-G10发酵性状可以在非选择培养基中稳定遗传。

以上为本篇毕业论文范文根癌农杆菌介导产甘油假丝酵母转化研究的介绍部分。

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