两种β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的表达及其合成能力的初步评价

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两种β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的表达及其合成能力的初步评价

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毕业论文范文题目：两种β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的表达及其合成能力的初步评价，论文范文关键词：两种β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的表达及其合成能力的初步评价
两种β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的表达及其合成能力的初步评价毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：烷基糖苷（APG）是一种新型绿色表面活性剂，因具有诸多优良特性而被广泛应用于化妆品、药品、洗涤剂等领域。传统的化学法合成APG，产品一般为各种异构体和副产物的混合物，其应用主要限于洗涤用品，而在生物、医药等对异构体纯度要求较高的领域则受到了很大限制。β-葡萄糖苷酶不仅可以催化单糖合成寡糖，还能催化单糖、寡糖或者活化的糖基衍生物与脂肪醇或芳香醇反应合成相应的糖苷化合物，在糖苷化合物的合成上非常具有潜力。目前，限制β-葡萄糖苷酶应用的主要问题有：酶分离纯化成本高，在有机溶剂体系中催化反应的稳定性较差，有机溶剂（此处忽略..）和底物的耐受性低，低水活度下会失去部分酶活等。因此，通过克隆、表达、筛选和改造等手段获得稳定、高效、耐受性强的β-葡萄糖苷酶是目前研究的热点之一。本研究通过克隆和全基因合成的方法获得泰国红木（DalbergiacochinchinensisPierre）和棘孢曲霉（Aspergillusaculeatus）来源的两种β-葡萄糖苷酶基因，利用毕赤酵母胞外分泌表达载体pPIC9K和本实验室构建的3种细胞表面展示表达载体，成功构建了两种酶的8种重组毕赤酵母工程菌，成功实现了棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶（ABGL）和泰国红木（略..）β-葡萄糖苷酶（DC-BGL）的胞外表达，并通过基于絮凝素Flo1pN端絮凝功能区（FS）、α-凝集素（NS）和毕赤酵母细胞壁蛋白Gcw21p的展示系统将其展示于毕赤酵母细胞表面。研究发现，分泌型重组菌经甲醇诱导表达，摇瓶发酵7dABGL上清酶活力最高达24.8U/mL，DC-BGL最高为1.08U/mL，ABGL的表达量和水解活力均高于DC-BGL。构建得到的6株表面展示β-葡萄糖苷酶的重组毕赤酵母中，以NS和Gcw21p为锚定蛋白的展示体系，均是共价锚定于细胞壁上，在表达ABLG和DC-BGL这两种β-葡萄糖苷酶上，NS和Gc（本文此处忽略..）w21p的展示效率相当，且都优于非共价锚定于细胞壁的FS展示系统。在初步探讨两种重组酶的全细胞催化剂通过逆水解反应催化合成烷基糖苷的能力：在未经条件优化的情况下，表面展示DC-BGL的全细胞催化剂催化合己基β-D-葡萄糖苷（HG）、辛基β-D-葡萄糖苷（OG）、癸基β-D-葡萄糖苷（DG）和十二烷基β-D-葡萄糖苷（DDG）的产率最高分别为11.9%、6.5%、6.6%和3.2%，均高于ABGL全细胞催化剂的产率，且前者合成OG、DG的产率是后者的2~3倍，DDG更是达到了将近10倍，这些都说明DC-BGL较ABGL具有更高的合成能力，特别是（此处忽略..）在中长链烷基糖苷的合成上。同时，随着底物脂肪醇碳链长度的增加，这两种β-葡萄糖苷酶催化合成烷基糖苷的产率都有所降低。而同种酶不同展示体系的全细胞催化剂在合成烷基糖苷上的得到产率表现出很小的差异，其主要区别在于展示体系中酶蛋白分子的表达量和细胞表面展示量的不同，而在相同的反应条件下，单位细胞上酶的展示量才是影响反应产率的关键因素。因此，在选择酶蛋白的表达体系时，应选择展示量较高的展示体系，这有利于提高单位质量的酶活力，从而提高产率。

以上为本篇毕业论文范文两种β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的表达及其合成能力的初步评价的介绍部分。

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