盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ 19kD亚基基因的克隆及其选择性剪切体

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盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ 19kD亚基基因的克隆及其选择性剪切体

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毕业论文范文题目：盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ 19kD亚基基因的克隆及其选择性剪切体，论文范文关键词：盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ 19kD亚基基因的克隆及其选择性剪切体
盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ 19kD亚基基因的克隆及其选择性剪切体毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：在很多真核生物线粒体和细菌中，复合体Ⅰ是呼吸链上的第一个酶。它将电子从NADH传递到辅酶O，同时伴随着质子跨膜的转移。变形菌门、革兰氏阳性菌、栖热菌／奇异球菌门、嗜热菌复合体Ⅰ的主要结构是已经知道的。细菌复合体Ⅰ一般主要由14个不同的亚基组成，代表了复合体Ⅰ的一个最小结构域。这14个亚基一共约有530kDa。但是对于它们的功能知之甚少，可能与醌还原和质子转移有关。另外真核细胞线粒体复合体Ⅰ与细菌复合体Ⅰ的14个亚基同源，只是增加了29个亚基。其分子量约为1MDa。与细菌复合体Ⅰ七个疏水亚基同源的线粒体复合体Ⅰ亚基都是由线粒体编码的。线粒体复合体Ⅰ其它亚基的功能就不清楚了。它们都是由核基因编（略..）码，在牛心和粗糙脉孢菌中，同源性也不高。它们也许是在14个亚基组成的最小结构域外围构建一个骨架，来避免活性氧带来的危害。另外两个亚基可能与生物合成有关。一个是酰基转运蛋白，另一个有40kDa，与NADPH紧密结合，属于还原酶／异构酶的异类家族。盐生杜氏藻(Dunaliellasalina)是一种极其耐盐的单细胞绿藻，能在0.1-5.5mol／LNaCl条件下生存。其极强的耐盐能力决定了盐生杜氏藻的呼吸链需要提供更大的能量来满足自身的能量需求。线粒体复合体Ⅰ正是呼吸链的第一个关键酶，所以盐生杜氏藻的抗逆性就与复合体Ⅰ的活性有密切的关系。本文在已经构建了盐生杜氏藻cDNA文库的基础上，完成（略..）了以下研究内容：1、克隆盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ19kD亚基。通过3’RACE和5’RACE得到全长基因。在3’RACE过程中，克隆到两条不同的完整3端序列。拼接得到两条完整19kD亚基cDNA序列，分别为682bp和727bp，编码两种不同的蛋白。同时在基因的非翻译区设计特异引物克隆全长。意外的是，RT-PCR得到另外两条不同的19kD亚基cDNA序列。大片段680bp，小片段1128bp。分别将这四条不同的cDNA序列由小到大依次命名为variantA，B，C和D。2、确定盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ19kD亚基存在选择性剪切方式。利用在非翻译区设计的特异引物扩增到19kD亚基的基因组序列，确定盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ19kD（文章此处忽略..）亚基是通过选择性剪切方式来调控。对基因组序列的分析可知19kD亚基的不同mRNA都是由同一基因组序列剪切而来。3、生物信息学分析。对盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ19kD亚基基因及其推演出的蛋白质序列进行了相关的生物信息学分析，预测它们的功能，发现了一些特性。例如盐生杜氏藻的线粒体复合体Ⅰ19kD亚基与衣藻相应亚基同源性最高。4、盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ19kD亚基在不同胁迫条件下mRNA转录水平差异的研究。通过荧光定量PCR的方法，表明所有的19kDmRNA都被氧、盐、鱼藤酮胁迫调控。5、测定盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ在不同胁迫条件下的酶活。发现：线粒体复合体Ⅰ19kD亚基很可能与线粒体复合体Ⅰ的生物（此处忽略..）作用过程；盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ对盐胁迫的损害具有较强的抵抗能力，盐胁迫通过氧胁迫来损伤盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ的活性；盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ为鱼藤酮敏感型，受鱼藤酮的特异抑制。通过对盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ19kD亚基的克隆，第一次在海藻中发现该亚基是通过选择性剪切方式调控。同时通过利用荧光定量PCR的方法，进行初步研究。在mRNA水平发现了复合体Ⅰ19kD亚基与复合体Ⅰ的关系。为更进一步研究复合体Ⅰ的结构和功能奠定基础。

以上为本篇毕业论文范文盐生杜氏藻线粒体复合体Ⅰ 19kD亚基基因的克隆及其选择性剪切体的介绍部分。

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