EGF和IGF对体外培养兔关节软骨细胞的影响

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EGF和IGF对体外培养兔关节软骨细胞的影响

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毕业论文范文题目：EGF和IGF对体外培养兔关节软骨细胞的影响，论文范文关键词：EGF和IGF对体外培养兔关节软骨细胞的影响
EGF和IGF对体外培养兔关节软骨细胞的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：前言外伤或疾病引起的关节软骨损伤在临床上很常见，但软骨组织中不具有血管与神经，其损伤后不易自我修复。对于关节软骨损伤的修复在目前的骨科临床、基础研究中仍是一个重要的课题。许多研究表明，生物活性因子在关节软骨的损伤、修复机制中，起着重要的调节作用。如胰岛素样生长因子(IGF)可刺激软骨细胞分化的表型。表皮生长因子(EGF)具有很强的促有丝分裂和刺激合成代谢的作用。在体内许多细胞表面都表达EGF受体。通过细胞生长因子的调控，在体外可以促进软骨细胞的分裂增殖，这方面国内外对TGF-β、IGF、BMP、bFGF的研究较多。尽管通过这些因子对体外培养的软骨细胞进行作用，促进了软骨细胞的分裂增殖，但机体对软骨细胞作用的内环境是多种因子相互作用、相互调节的结果。局部应用生长因子时，有效成分易被稀释或在机体对软骨细胞作用的内环境中丢失。为了寻找更多的可能促进软骨细胞增殖的细胞因子，我们选择（本文此处忽略..）用EGF对体外培养的软骨细胞进行调节。因为目前研究认为，EGF对上皮细胞具有很强的致有丝分裂作用，在软骨细胞表面已发现EGF受体存在。关于EGF的研究，在促进上皮细胞的分裂增殖方面研究较多，在对软骨细胞作用的方面研究较少。关于EGF对体外培养的软骨细胞具体定量的研究，以及EGF与IGF协同作用的研究方面，在国内尚未见到相关报道。本实验试图通过不同剂量的EGF对体外培养软骨细胞的作用，以及通过EGF、IGF的分别作用和协同作用相比较，了解其对软骨细胞存活数目和分裂增殖的影响，进而对EGF在体外培养的软骨细胞中的作用效果进行评价，为关节软骨细胞的修复提供进一步的理论依据。材料与方法1．软骨细胞的培养：无菌条件下，片状切取2周龄新西兰白兔关节面软骨（脑骨近端、股骨近、远端及胜骨近端人放人PBS液冲洗2次，将软骨片切成二．ornmxl．ornmxl．stnm左右小粒。经0．2％11型胶原（文章此处忽略..）酶10Inl，37t条件下振荡消化3．sh，再用200目不锈钢滤网过滤，去除杂质，获取细胞。此细胞用PBS液洗＊离心smim三遍，弃上清，沉淀物接种到含15％胎牛血清（FCS）的DMEM培养基中，在培养瓶中培养，培养条件为37tj％CO如原代细胞贴壁后，隔日更换培养基，汇合成单层细胞后，传代培养至2代。2、软骨细胞的观察及检测：门）倒置显微镜观察细胞形态、生长情况；p）细胞爬片Giemsa染色光镜观察细胞生长情况；门）细胞爬片免疫组织化学方法检测11型胶原表达情况；k）酶联免疫检测仪（Mry）测定了解细胞生长因子对软骨细胞存活数目的影响八5）流式细胞仪检测细胞因子对软骨细胞增殖的影响。实验结果1、倒置显微镜下可见软骨细胞接种后呈球形，为悬浮状。在接种后3—4小时即可发现少量细胞贴壁，细胞贴壁后变成扁平形态，呈多形性。之后48－72小时，仍有继续贴壁的细胞，体积变小，细胞多形性更明显，扁平细胞变多，可见细胞核分裂相（文章此处忽略..），一部分成复层生长，少数细胞间有间隙的细胞呈四边形或圆形。当细胞在培养瓶中分裂增殖达到汇合成单层细胞后，核分裂相较少，这时可以传代。·2·2、通过细胞爬片Giemsa染色光镜观察，我们可以更清楚地看到软骨细胞的形态，多数为小细胞，形态有小梭形J圆形及小多边形，可以见到核分裂。同时还可以看到许多细胞中含有分泌小泡。3、细胞爬片D型胶原免疫组化染色光镜观察，可见在细胞聚集的地方，细胞的胞浆被染成棕色，细胞相互接触少的地方棕色较淡，细胞密集生长的地方棕色较深，并且细胞外也可见到棕色。说明在培养的骨软骨细胞中有D型胶原表达，说明培养的细胞具有软骨细胞的特征，软骨细胞培养成活。4、细胞存活数情况（MT］？测定结果卜以酶联免疫检测仪（rs）测定所得的光密度（OD）值，此值与细胞存活数成正比，即作为细胞相对数，绘出加不同浓度EGF或（和）IGF后的OD值直方图，其结果经过统计学处理，分析（本文此处忽略..）表明，同时加EGF与IGF比单独加任何一种细胞因子都要好，而其最佳浓度组合为EGF10n才Inl和IGF50ng／Inl。所以我们认为，同时加EGF与IGF，并且浓度组合为EGF10ng／tnl和IGF50ng／Inl时的刺激软骨细胞的增殖能力最强。5＼将流式细胞仪测定结果按G／M期和S期的百分数比值，转换成增殖指数，表示增殖情况。其结果经过统计学处理分析，发现无论是单独加人EGF或IGF，还是两者联合应用，均可以刺激细胞增殖瞩＜0．01人说明＊＊F和1＊F均是骨软骨细胞增殖促进剂，这与M’IT测定结果一致。同时发现，EGF＊GF两者联合应用的促进细胞增殖作用均强于任何一种细胞因子的单独应用，这也进一步证实了M’IT测定的结果。讨论在软骨细胞增殖和分化的调节机制中，有许多细胞因子参与。

以上为本篇毕业论文范文EGF和IGF对体外培养兔关节软骨细胞的影响的介绍部分。

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