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牛Nramp1基因表白载体的构建

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毕业论文范文题目：牛Nramp1基因表白载体的构建，论文范文关键词：牛Nramp1基因表白载体的构建
牛Nramp1基因表白载体的构建毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：天然免疫力相干巨噬细胞蛋白1(Nramp1)与机体对胞内寄生菌易感性相干。研究证明:机体对胞内寄生菌的抵抗力强弱与Nramp1的表白存在量依附关联。为了研究牛Nramp1的功能,探寻转基因抗胞内感染菌牛新材料创制的功能基因,本实验克隆了秦川牛Nramp1开放浏览框及其N端序列连接pET-32a、pGEX-4T-1载体进行原核表白。构建了Nramp1强启动子牛Nramp1真核表白载体及其吞噬细胞特异性真核表白载体。成果如下:1通过RT-PCR方法从秦川牛外周血巨噬细胞扩增出Nramp1完全浏览框架序列,与pMD18-Tsimpl（本文此处忽略..）e载体连接,酶切鉴定(命名为pMD18-N)后测序发明该序列与GenBank中的牛的相应的基因序列(GenBank序列号U12862.1)对比存在两个碱基差别:第一个差别碱基以致基因编码的第49个氨基酸产生变更使苏氨酸(ACA)改变为丙氨酸(GCA);第二个差别碱基并未引起其编码氨基酸的差别,即第53位氨基酸均为精氨酸(AGG→CGG)。pMD18-N酶切后获取目标基因序列连接于pET-32a表白载体:将其命名为pET-N。将重组质粒pET-N转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),载体引诱后表白产物呈现特异性条带,蛋白分子量与预计大小一致,为可溶性（文章此处忽略..）蛋白,Western-blot鉴定该蛋白为目标蛋白。2通过RT-PCR方法从秦川牛外周血巨噬细胞扩增出Nramp1完全浏览框架序列,测序后与pIRES2-EGFP载体连接,双酶切鉴定,获得强启动子牛真核表白载体pIRES2-N;以pMD18-N为模板,PCR扩增出Nramp1完全浏览框架序列,测序后与pEGFP-N3载体连接,双酶切鉴定,获得获得强启动子牛真核表白载体pEGFP-N;通过PCR的方法扩增出Nramp1调控区序列,获得牛Nramp1吞噬细胞特异性真核表白载体pEGFP-PN。3利用BepiPred1.0b（略..）Server软件对Nramp1氨基酸序列分析后,利用RT-PCR方法从秦川牛外周血巨噬细胞扩增出Nramp1编码基因N端序列,并将其克隆到pMD18-Tsimple载体,酶切鉴定(命名为pMD18-N2)后测序分析发明秦川牛Nramp1N端基因序列与GenBank中的相应的牛基因序列(GenBank序列号U12862.1)对比存在一个碱基差别,以致基因编码的第49个氨基酸产生变更使苏氨酸(ACA)改变为丙氨酸(GCA)。pMD18-N2酶切后获取目标基因序列连接于pGEX-4T-1表白载体,命名为pGEX-N2。将重组质粒pGEX-N2转化大肠杆菌E.c（此处忽略..）oliBL21(DE3),经IPTG引诱,SDS-PAGE电泳检测GST-Nramp1-N融合蛋白表白,并筛选最佳引诱前提(35℃、0.1mmol/mLIPTG引诱10h),用谷胱甘肽Sepharose4B介质分别获得纯化的融合蛋白。上述成果为进一步研究牛Nramp1功能及转基因抗病牛的培养奠定了基本。

以上为本篇毕业论文范文牛Nramp1基因表白载体的构建的介绍部分。

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