微小隐孢子虫Rhomboid蛋白抗原定位与免疫保护性研究

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微小隐孢子虫Rhomboid蛋白抗原定位与免疫保护性研究

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毕业论文范文题目：微小隐孢子虫Rhomboid蛋白抗原定位与免疫保护性研究，论文范文关键词：微小隐孢子虫Rhomboid蛋白抗原定位与免疫保护性研究
微小隐孢子虫Rhomboid蛋白抗原定位与免疫保护性研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：隐孢子虫(Cryptosporidium)是一种寄生性原虫,主要寄生于人和其他哺乳动物的胃肠道、禽类的呼吸道等粘膜上皮细胞内,引起隐孢子虫病。该病分布广泛,人畜感染率高,且危害严重,临床上以严重水样腹泻为主要特征。目前已有200余种药物被试用于治疗该病,但尚无特效药物。有学者通过对隐孢子虫亚单位疫苗及核酸疫苗的研究认为有效的疫苗对该病的防治具有一定的作用,关键在于选择有效的疫苗候选抗原（略..）。Rhomboid蛋白是顶器门原虫侵入与粘附宿主细胞的重要蛋白,有望成为疫苗的候选抗原。为探讨微小隐孢子虫Rhomboid基因对微小隐孢子虫感染的免疫保护力,本试验利用生物信息学技术从微小隐孢子虫基因组cDNA中预测Rhomboid基因开放阅读框,设计引物,从微小隐孢子虫长春株总RNA中扩增出Rhomboid基因,将其克隆入原核表达载体并表达出微小隐孢子虫重组Rhomboid（本文此处忽略..）蛋白,利用间接免疫荧光技术对该蛋白进行抗原定位;同时用DNA重组技术将微小隐孢子虫Rhomboid基因克隆入真核表达载体构建核酸疫苗,将所构建的微小隐孢子虫Rhomboid重组蛋白与核酸疫苗分别免疫小鼠检测其免疫保护力。结果显示:扩增出1395bp的开放阅读框,经Blast比对显示核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.9%和99.6%。并表达出51KDa的重组融合蛋白,Westernblot试验证实所得蛋白（文章此处忽略..）具有反应原性,间接免疫荧光显示该蛋白位于子孢子;用间接免疫荧光方法在重组质粒转染后的Hela细胞中检测到特异蛋白,通过Westernblot试验证实所得蛋白具有反应原性;重组Rhomboid蛋白免疫保护性试验结果显示,随着免疫次数的增加抗体滴度逐渐增加,试验组与对照组相比差异极显著(P0.01)。CD4+、CD8+T淋巴细胞数与对照组相比差异均不显著(P0.05)。试验组小鼠对抗微小隐孢子虫感染具有（文章此处忽略..）一定保护作用,卵囊排出量明显减少,排出时间缩短2d,减虫率达65.48%。核酸疫苗免疫保护性试验结果表明,试验组与对照组相比,特异性抗体滴度显著增加(P0.01);CD4+、CD8+T淋巴细胞数与对照组相比差异均不显著(P0.05)。攻虫后试验组小鼠卵囊排出量明显减少,排出时间缩短2d,减虫率达63.1%。

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