犬细小病毒LM株的序列分析及VP2基因的真核表达

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犬细小病毒LM株的序列分析及VP2基因的真核表达

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毕业论文范文题目：犬细小病毒LM株的序列分析及VP2基因的真核表达，论文范文关键词：犬细小病毒LM株的序列分析及VP2基因的真核表达
犬细小病毒LM株的序列分析及VP2基因的真核表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)属于细小病毒科,细小病毒属。可引起犬出血性腹泻和心肌炎,使白细胞大量减少,在幼犬中的发病率和死亡率都很高。是危害养犬业最为严重的传染病之一。本研究对CPV-LM株病毒进行传代培养,对形态学、物理化学和生物学等进行鉴定及分析。在F81细胞上培养病毒,病毒可大量增殖,使细胞发生肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变;电镜观察病毒粒子呈立体对称,直径为20nm,无囊膜;能凝集猪红细胞,第4代病毒的血凝效价为210,血凝能被抗犬细小病毒单克隆抗体所抑制;免疫酶染色试验说明病毒感染了F81细胞并能与已知犬细小（本文此处忽略..）病毒单抗反应。采用PCR方法对CPV-LM株分5段进行扩增,测序拼接后得到包括3’端回文结构及所有阅读框架的长约4974bp基因组。对犬细小病毒基因进行核苷酸序列分析,根据CPV的分型依据推断CPV-LM株为CPV-2型。对非结构蛋白NS基因分析发现核苷酸突变位点较多,但多为同义密码子突变,与参考株比较同源率可达99%以上。对结构蛋白VP2基因分析发现其所编码氨基酸发生突变347A→T、562V→L、564S→N和568G→A;CPV-LM与Vac1株、CPV-Cv株、388/05-3株和CPVint株属同一分支,与所选的CPV-2型毒株比较其核苷酸序列的同源率在99%以上,与其他抗原型毒（略..）株的同源率也都在97.9%以上。将VP2基因插入真核表达载体pEGFP-C1,构建重组表达质粒pEGFP-VP2。重组质粒与空载体质粒同时转染293T细胞,72h后在荧光显微镜下可见重组质粒转染的细胞中出现颗粒状绿色荧光,说明pEGFP-VP2发生了瞬时表达,证明VP2基因具有正确的阅读框。设计两对引物扩增VP2基因,得到VP2(BamHⅠ/EcoRⅠ)和VP2(BamHⅠ/XhoⅠ),将两段VP2基因分别插入杆状病毒表达载体pFastBac1和pFastBacHT。构建了4种重组转移载体质粒,分别命名为pFastBac1-VP2(BamHⅠ/EcoRⅠ)、pFastBac1-V（略..）P2(BamHⅠ/XhoⅠ)、pFastBac-HT-VP2(BamHⅠ/EcoRⅠ)和pFastBac-HT-VP2(BamHⅠ/EcoRⅠ)。将其分别转座入DH10Bac感受态细胞,提取BacmidDNA,获得4种相应的重组Bacmid,分别转染昆虫细胞Sf9,获的重组杆状病毒,命名为:rBV-VP2(B/E)、rBV-VP2(B/X)、rBVHT-VP2(B/E)和rBVHT-VP2(B/X)。通过免疫酶染色、SDS-PAGE和Western-blot实验,结果表明4种重组Bacmid在杆状病毒表达系统中均得到了表达,并具有反应活性。本研究对CPV-LM株进行生物学鉴（本文此处忽略..）定,用PCR方法克隆得到了包括3’端回文结构及涵盖所有阅读框架的长为4974bp的基因组序列,丰富了CPV基因库信息,为CPV的感染性克隆奠定基础;对主要衣壳蛋白VP2基因进行序列分析,为探索CPV抗原漂变奠定了基础;借助于杆状病毒表达系统制备VP2的蛋白,为进一步研制VP2蛋白特异单抗及筛选CPV基因工程苗创造了条件。

以上为本篇毕业论文范文犬细小病毒LM株的序列分析及VP2基因的真核表达的介绍部分。

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