RNA干扰研究p8/com1基因在肝细胞癌中的功能

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RNA干扰研究p8/com1基因在肝细胞癌中的功能

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毕业论文范文题目：RNA干扰研究p8/com1基因在肝细胞癌中的功能，论文范文关键词：RNA干扰研究p8/com1基因在肝细胞癌中的功能
RNA干扰研究p8/com1基因在肝细胞癌中的功能毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：背景与目的:p8又称com1,是在研究急性胰腺损伤时发现的一个损伤后表达水平迅速上调的应激蛋白,后来研究发现,其在胰腺癌、甲状腺癌、乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤组织中存在差异表达,并通过影响细胞的生长、凋亡以及转移等过程参与这些肿瘤的发生、发展过程,被认为是一个肿瘤相关的应激分子。目前国内外关于p8的研究并不多,已有研究表明其在多种肿瘤发生、发展中发挥作用,但p8在肝细胞癌中的功能研究目前尚无报道。本文的研究目的在于探讨p8在肝细胞癌发生中的功能。内容:以肝癌细胞系为研究对象,敲减肝癌细胞系中p8基因的表达,观察细胞的增殖、迁移、克隆形成能力等生物学行为以及相关分子的变化情况,初步探讨p8基因在肝细胞癌发生中的作用。方法:1、通过GenBank检索人的p8基因的mRNA序列,应用网络在线工具设计2条针对p8基因的小干扰RNA(SmallinterferenceRNA,siRNA),设计干扰序列的dsDNA并进行生物合成,双酶切pSuperior.puro干（略..）扰载体,将合成的dsDNA克隆至酶切质粒,质粒抽提并测序鉴定。2、利用Real-timePCR在mRNA水平检测肝癌细胞系BEL-7402、QSG-7703、SMMC-7721、HepG2中p8的表达,选取p8表达最高的HepG2细胞株为研究的靶细胞,用脂质体法将干扰载体与对照载体转染入HepG2细胞中,经0.5ug/ml的嘌呤霉素(Puromycin,puro)筛选获得稳定的单个克隆来源的细胞株,利用Real-timePCR对筛选出细胞株p8在mRNA的表达水平进行检测。3、对p8干扰后获得的HepG2肝癌细胞株,用MTT法检测其增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,平板克隆形成实验检测克隆形成能力,Transwell迁移实验检测迁移能力,并利用Westernblot检测CDK4、CyclinD1、p27、p21、p16、Bim、β-catenin及c-myc等分子的表达变化情况。结果:1、通过Invitrogen公司网站在线软件设计p8的干扰序列,分别为:p8i-1:5’-GACCAAGCTGCAGAAT（略..）TCA-3’;p8i-2:5’-GACTCCAGCCTGGATGAAT-3’。并成功将包含各干扰序列的dsDNA克隆至质粒pSuperior.puro中,经测序鉴定后,证实所连入的序列与设计序列完全一致,分别将干扰质粒命名为pSuperior.puro/p8i-1、pSuperior.puro/p8i-2。2、培养BEL-7402、QSG-7703、SMMC-7721、HepG2肝癌细胞系,利用Real-timePCR检测各细胞系中p8在mRNA水平的表达情况,结果显示在四种细胞系中,HepG2细胞中p8的表达最高。采用脂质体法将上述各组干扰质粒及对照载体成功转染至HepG2肝癌细胞系中,经0.5ug/ml的puro抗性筛选3周后,挑取单个细胞形成的阳性克隆并扩大培养,各干扰载体及对照载体分别获得一个细胞株,命名为HepG2/p8i-1、HepG2/p8i-2与HepG2/v。提取三个细胞株细胞的总RNA,利用Real-timePCR检测筛选出的三株肝癌HepG2细胞中p8的表达情况,结果表明与对照Hep（文章此处忽略..）G2/v相比,HepG2/p8i-1与HepG2/p8i-2细胞p8的表达显著降低,抑制率分别为76.6%与94.9%。3、MTT实验表明p8基因干扰的肝癌HepG2/p8i-1与HepG2/p8i-2组细胞增殖能力均显著低于对照HepG2/v细胞(p0.01);平板克隆形成实验表明HepG2/p8i-1与HepG2/p8i-2组细胞单个细胞形成克隆的能力与对照HepG2/v相比显著降低(分别p0.05;p0.01);流式细胞术检测细胞生长周期表明,与对照HepG2/v细胞相比,HepG2/p8i-1与HepG2/p8i-2细胞G1期细胞比例增加,细胞周期发生G1期阻滞;Transwell迁移实验表明,HepG2/p8i-1与HepG2/p8i-2细胞穿膜数较对照HepG2/v细胞穿膜数明显减少(分别p0.01;p0.05);Westernblot实验表明,HepG2/p8i-1与HepG2/p8i-2细胞中c-myc蛋白的表达较对照HepG2/v细胞降低,而CDK4、CyclinD1、p27、p21、p16、Bim、β-catenin的表达与对照相比未见明显变化。结论:1、我们设计的两条针对p（文章此处忽略..）8基因的干扰序列具有良好的干涉效果,可以有效地抑制肝癌细胞HepG2中p8基因的表达。2、HepG2肝癌细胞的p8基因,经过有效RNA干扰后,细胞的增殖能力减慢,克隆形成能力减弱,细胞周期发生G1期阻滞,细胞的迁移能力减弱,c-myc表达降低。p8可能通过c-myc,作用于细胞周期,影响增殖能力。我们在国内外首次对p8/com1在肝细胞癌中的功能进行了初步研究,并认为p8在肝细胞癌中起着促进细胞增殖与迁移的作用,推测其促进增殖的机制可能是通过正性调节癌基因c-myc来发挥作用。

以上为本篇毕业论文范文RNA干扰研究p8/com1基因在肝细胞癌中的功能的介绍部分。

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