一种新型Rab蛋白Rab7b的分子克隆与生物学功能研究

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一种新型Rab蛋白Rab7b的分子克隆与生物学功能研究

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毕业论文范文题目：一种新型Rab蛋白Rab7b的分子克隆与生物学功能研究，论文范文关键词：一种新型Rab蛋白Rab7b的分子克隆与生物学功能研究
一种新型Rab蛋白Rab7b的分子克隆与生物学功能研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：Rab蛋白是属于Ras蛋白超家族的小G蛋白(smallG-proteinorsmallGTPase)，分子量大多在22-25kDa之间，表达于从酵母、果蝇、小鼠到人类等各种真核生物中，发挥着各种各样的功能；其在酵母中称为YPT／SEC4P在高等真核生物中称为Rab。Rab蛋白的细胞内定位十分广泛，分布于胞内各个细胞器的胞膜浆侧，同一个细胞器可以有多个Rab蛋白，以维持蛋白转运的连续性和细胞器膜的完整性，如晚期内吞体就同时拥有Rab7和Rab9。Rab7可以介导蛋白从早期内吞体向晚期内吞体转运或早晚期内吞体的融合，而Rab9则回运甘露糖受体(mannose-6-phosphatereceptor，M6PR)到反式高尔基复合体(trans-Golginetwork)。Rab蛋白家族成员和其他小G蛋白一样可以结合GTP／GDP，在自身GTP酶的水解作用和其他蛋白(GEF、GAP、GDI)的调节作用下发生GTP(活化状态)和GDP(无活性)结合形式的转变；同时Rab蛋白也在膜结合性(membrane-bound)和胞浆可溶性(cytosolic)之间变化，一个变化过程对应着一个功能（本文此处忽略..）循环，接着Rab蛋白回到初始状态参与下一个循环。Rab蛋白主要通过调节囊泡(vesicle)的出芽(budding)、运输、锚定和融合，参与细胞的分化发育、细胞的内吞和外排、胞内蛋白的运输、交换和定位以及神经递质的运输和释放。Rab蛋白功能的发挥也需要其他的蛋白存在，即所谓的效应蛋白(effector)。通过与效应蛋白的结合，Rab蛋白才能正确地发挥调节作用。不同的Rab蛋白结合的效应蛋白不同但也可以结合同一种效应蛋白，即所谓的双功能效应蛋白(bifunctionaleffector)，如Rab4和Rab5都可以和效应蛋白Rabaptin-5结合。双功能效应蛋白可能有助于蛋白转运中不同Rab蛋白间的协调；而同一种Rab蛋白也可能有多种效应蛋白，这可能与Rab蛋白功能的多样性有关。同时越来越多的实验表明，胞内定位不同的Rab蛋白在蛋白转运上是分工协作、协调一致的，任何一个环节改变都会导致蛋白转运的异常。Rab蛋白和另浙江大学硕士学位论文单核细胞系分化相关小G蛋白Rab7b一种调节蛋白SNARE(N一ethyl一maleimidesensitivef（此处忽略..）actor一solubleNSFattachmentprotein)在介导蛋白转运上可以说是一对功能互补的调节蛋白，只是侧重点不同。目前，共约有40个Rab蛋白被发现，定位于胞内各个细胞器，调节蛋白转运的各个环节。但通过人类基因组测序分析发现大约有60左右个Ra匕蛋白的EST。因此对Rab蛋白的研究任重而道远。同时对Rab蛋白的深入研究有助于细胞膜内外，胞浆各个细胞器之间及胞浆胞核之间蛋白转运机制体系的进一步完善，并为临床上由于蛋白转运异常而引起的疾病提供新的思路和方法。白血病是临床上恶性程度很高的一类恶性肿瘤，至今没有一种理想的治疗方法。在基础研究方面，人们用各种诱导剂来诱导白血病细胞的分化以寻求在发病机制和治疗方法上新的突破。研究者在用诱导剂(RA、ATRA、户MA汀队、DMSO、VitD3)来处理各种白血病细胞(HL一60、NB4、U937、THPI)时，发现Rab蛋白伴随着细胞的分化而升高。NIShio等研究发现Ra匕30在白血病细胞的粒细胞分化过程中是增加的，并提出可能是与分化而来的粒细胞的功能有关(中性粒细胞特异性的颗粒外排，嗜酸性和嗜碱性粒细胞（略..）的脱颗粒)。其他的研究者在实验中也发现，Rab1A、RabZ、Rab4、Rabs、Rab6、Rab7在白血病细胞的粒系或单核系分化途径中都有升高。可惜的是关于这方面的研究很少，也不深入。Rab蛋白和白血病细胞分化究竟是什么关系，是分化过程中的伴随现象还是功能上的需要，与分化方向有什么联系(Rab蛋白在白血病细胞的两种分化过程中表达不同)，在分化后的细胞中起什么样的作用等都需要提供新的方法和工具来更深入的研究。本课题所研究的新分子Rab7b是在对人树突状细胞(dendritieeel!，DC)的cONA文库随机大规模测序中发现的。我们通过5’RACE获得了全长基因的编码序列，然后利用OC的反转录产物模板，克隆了Rab7b的全长cONA(已经在GenBank登录，基因登录号为AF094596)。Rab7beDNA全长1571bP，开放阅读框600bp，编码199个氨基酸，预计分子量为22.skoa。蛋白序列比较发现此蛋白和另一个定位于晚期内吞体的人源Rab7蛋白有很高的一致性，因此我们把它命名为Rab7b。通过同源性搜索，在核酸水平上与人BC017092和鼠BCOI9395浙江大学硕士学位论文单核细胞系分化相关小G（本文此处忽略..）蛋白Rab7b克隆分别有99%和85%的同源性，蛋白水平上与人Rab7分别有超过50%的一致性和65%的相似性。同时我们也发现一个鼠源的和人源Rab7b有92%相似程度的蛋白，可能是鼠源的Rab7b同源性蛋白。蛋白结构分析发现，Ra匕7b有三个蛋白激酶C(PKC)磷酸化位点(56一58，153一155，186一188aa)，三个酪蛋白激酶11/CKll磷酸化位点(32一35，91一94，177一180aa)，一个酪氨酸蛋白激酶磷酸化位点(143一149)，三个氨基端豆范酞化(N一myristoylation位点)(18一23，80一85，83一saaa)，一个ATp/GTp结合基序(15一22aa)和一个细胞薪附序列(103一105aa)。Rab蛋白家族梭基端末端有一段特殊结构，有五种形式CXXX、CC、CXC、

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