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Endoglin结合肽的筛选及其亲和力的鉴定

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毕业论文范文题目：Endoglin结合肽的筛选及其亲和力的鉴定，论文范文关键词：Endoglin结合肽的筛选及其亲和力的鉴定
Endoglin结合肽的筛选及其亲和力的鉴定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景:卵巢恶性肿瘤是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一,由于缺乏有效的早期诊断技术,及浸润性生长和转移迅速的特点,其死亡率已居女性生殖系统恶性肿瘤之首。卵巢癌是一高度血管化肿瘤,其生长迅速依赖于其有丰富的血管生成及其供给的营养物质,研究发现即使在卵巢癌的早期(Ⅰ期)就有显著的新生微血管生成,其记数明显较良性或低度恶性肿瘤高。Endoglin又名CD105,是内皮细胞表面与增殖相关的膜抗原,在有活性血管生成区域及肿瘤新生的血管内皮细胞和肿瘤组织边缘部分血管内皮细胞中高度表达,在正常（文章此处忽略..）组织中无表达,与肿瘤血管生成及肿瘤的浸润、转移密切相关,可望成为卵巢癌早期诊断和治疗的理想的分子靶位。目的:利用噬菌体12肽库筛选可与Endoglin结合的小分子多肽,为进一步研究Endoglin在卵巢癌的早期诊断方面的作用奠定理论基础。研究方法及结果:以rhEndoglin为靶分子,对噬菌体12肽库(Ph.D.-12TM)进行亲和筛选。经过3轮筛选,得到富集多肽。随机挑取16个克隆,双夹心ELISA法鉴定其亲和性,测定亲和力高的阳性噬菌体克隆的DNA插入序列,经DNAstar软件翻译出与噬菌（本文此处忽略..）体外壳融合蛋白的氨基酸序列,共获得5种不同的多肽序列,其中2个克隆的氨基酸序列为:AHKHVHHVPVRL。竞争性ELISA显示优势噬菌体克隆与rhEndoglin有较强的结合活性。竞争抑制实验显示阳性噬菌体克隆能够模拟Endoglin受体或抗体上的结合表位。非竞争性ELISA法(Beatty法)测定优势多肽融合噬菌体单克隆与Endoglin蛋白的亲和常数,噬菌体融合多肽Ⅰ、Ⅳ与靶蛋白的亲和力之比为143.1:23.9。结果表明噬菌体融合多肽Ⅰ与靶蛋白有较强的结合力,与竞争性ELISA法分析的（此处忽略..）结果相符。合成固相多肽Ⅰ(AHKHVHHVPVRL)及多肽Ⅳ(HYHTHHTKVRTP),经戊二醛偶连法包被多肽,Beatty法测定两者的功能性亲和常数,分别为:(2.956±0.749)×106M-1和(8.782±0.189)×104M-1。结果进一步证明多肽Ⅰ(AHKHVHHVPVRL)与靶蛋白具有较强的结合力。生物素标记多肽(Biotin-AHKHVHHVPVRL),荧光素标记亲和素(Avidin/FITC),间接免疫荧光法检测该结合肽的体外结合能力。体外分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),生长活跃期时制备细胞爬片,间接免疫荧光染色证实多（文章此处忽略..）肽(AHKHVHHVPVRL)与靶蛋白rhEndoglin具较强的结合活性。结论:利用噬菌体肽库技术可获得与rhEndoglin蛋白结合的活性小分子肽(AHKHVHHVPVRL)。在ELISA检测、竞争结合抑制实验,以及体外细胞免疫荧光实验中,该结合肽均表现出与Endoglin较强的结合活性,可望为卵巢癌的早期诊断提供理想的靶向载体。

以上为本篇毕业论文范文Endoglin结合肽的筛选及其亲和力的鉴定的介绍部分。

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