金黄色葡萄球菌表面蛋白的原核表达、纯化及免疫效应研究

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金黄色葡萄球菌表面蛋白的原核表达、纯化及免疫效应研究

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毕业论文范文题目：金黄色葡萄球菌表面蛋白的原核表达、纯化及免疫效应研究，论文范文关键词：金黄色葡萄球菌表面蛋白的原核表达、纯化及免疫效应研究
金黄色葡萄球菌表面蛋白的原核表达、纯化及免疫效应研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)可引起一系列不同程度的感染；一个不太严重的伤口感染可发展为恶性的败血症、骨髓炎、脓毒性关节炎或是心内膜炎。S.aureus更是医院感染中最常见的病原菌之一。甲氧西林抗性的金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantS.aureus,MRSA)菌株，可抵抗大多数临床上应用的抗生素。令人忧虑的是，MRSA菌株对治疗葡萄球菌感染最为有效的抗生素——万古霉素的敏感性日益降低，这些对万古霉素不敏感的金黄色葡萄球（文章此处忽略..）菌(Vancomysin-intermediateS.aureus，VISA)菌株的出现使人们产生了金葡菌感染不能治愈的恐惧感，因此必须寻找到一种有效的治疗方法。研究表明，基于金葡菌细胞外结合基质蛋白(ECMBPs)的重组蛋白疫苗对于机体更有保护效果。基于PCR技术，分别扩增了纤连蛋白结合蛋白(FnBP)和胶原蛋白结合蛋白(Cna)的基因fnb和cna。并克隆于原核表达载体pET-32a(+)，分别构建了融合基因表达质粒trx-fnb-pET-32a(+)，trx-cna-pET-32a(+)和非融合基因表达质粒fnb-（文章此处忽略..）pET-32a(+)，cna-pET-32a(+)；在IPTG的诱导下获得了高表达量的融合蛋白Trx-Cna，Trx-FnBP(表达量分别占菌体总量的58.8％、52.8％)和非融合蛋白Cna，为获得更为广谱的双价疫苗侯选蛋白，利用重叠引物延伸PCR技术，将fnb和cna基因连接起来克隆入pET-32a(+)构建了与载体蛋白基因Trx相连的Cna+fnb-pET-32a(+)质粒，并获得高量表达，表达量占菌体总量的26.5％。分别利用金属鏊和亲和层析和离子交换层析获得高纯度Trx-Cna、Trx-FnBP、Cna和融合Trx的Cna-（本文此处忽略..）fnBP蛋白抗原。用于免疫昆明系和Balb／c小鼠，经ELISA测定各组与对照组相比抗体滴度有大幅升高(＞10~8)。淋巴细胞增殖实验初步表明，所获抗原具良好的细胞免疫应答的效果。末次免疫后一周进行攻毒实验，初步的免疫保护实验表明，S.aureusstrainS-6，5×10~7CFU，5％的MUCIN，1ml／只的剂量，腹腔注射后，各免疫组保护率分别是42.8％(CN组)，50％(FN组)，50％(CN-FN组)远比Control组(25％)为高。经WesternBlot分析，我们所得抗原与免疫动物的抗血清有良好的结合活性。结论我们所获（此处忽略..）的金黄色葡萄球菌表面蛋白是可溶性的，较好地保持了其免疫原性，实现了其在大肠杆菌中的高量表达;我们首次尝试将金葡菌的fnb和cna基因连接起来，构建双价疫苗从而扩大了蛋白疫苗的保护范围，使之可以防治绝大部分金葡菌株;动物实验表明，这些蛋日具有良好的体液免疫和细胞免疫应答的效果;开发金葡菌ECMBPs重组疫苗具良好的应用前景。

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