体外冲击波结合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究

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体外冲击波结合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究

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毕业论文范文题目：体外冲击波结合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究，论文范文关键词：体外冲击波结合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究
体外冲击波结合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:骨折不连接(non-unionoffracture,NUF)也称骨折不愈合,是骨折术后常见的并发症,临床工作中发现骨折病人中,由于各种原因约有5%～10%的病人会出现骨折不连接,一旦产生骨不连其治疗仍是临床工作中面临的难题之一。九十年代初期,体外冲击波疗法(ExtracorporealShockWaveTherapy,ESWT)成功用于骨不连的基础和临床研究,并取得积极成果,但结合干细胞移植治疗骨不连未见报道。近年来,应用骨组织工程修复骨缺损和骨不连是当今的一个热点,种子细胞是骨组织工程的重点,骨髓中的骨髓间充质干细胞(Bonemarrowstemcells,BMSCs)具有自我复制、自我更新、多向分化等干细胞特性,并在一定诱导条件下可分化为成骨细胞和成软骨细胞,业已具备成为骨组织工程的理想的种子细胞的条件。本研究将ESWT结合兔自体BMSCs移植治疗兔骨不连,与ESWT或BMSCs移植治疗兔骨不连观察比较治疗的效果和差异,为临床治疗骨不连探索一种新的治疗方法,从而指导临床治疗。方法:选择新西兰大耳兔39只建立“截骨”骨不连模型。术后10周经X线证实为骨不连,采用随机对照（略..）试验的设计原则分为四组A、B、C、D。A组每只动物骨不连行ESWT+BMSCs干预;B组BMSCs移植;C组行ESWT;D组不做任何治疗。无菌条件下从股骨远段内侧穿刺抽取A、B组自体兔骨髓间充质干细胞进行培养。四个组纳入实验流程,A组、C组动物骨不连断端采用进行体外冲击波治疗;随后A组和B组行自体BMSCs移植治疗骨不连;对照组不做任何处理。各组兔子在治疗前和治疗后2周、6周、10周重复x线检查,所得X线片子,扫描后在计算机上精确测量治疗前后骨折间隙的平均宽度,计算骨缺损区骨痂的生成量。摄片后处死动物,处死前15d和前7d连续肌内注射四环素3d。取骨折间隙组织HE染色观察成骨细胞、骨小梁的数量和排列的形成。免疫组化方法观察溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记情况,测定标本中的血管内皮生长因子(Vascularendothelialcellgrowthfactor,VEGF)含量。不脱钙切片荧光显微镜下观察新骨形成情况计算骨矿化率(bonemineralizationappositioate,MAR)。对所有数据x±s表示统计学分析,设定P（文章此处忽略..）0.05为有统计学意义。结果:1骨髓间充质干细胞的形态观察:分离获取了高纯度的BMSCs,保持了细胞的活性。Percoll分离液(l.073g/ml)分离的骨髓单个核细胞24小时后贴壁,细胞呈圆形,48～72小时后呈纺锤形,梭形,增殖迅速,原代培养约10～14天左右可以达到80～90%融合,传代细胞24小时完全贴壁,5～7天达到80～90%融合,传代后的细胞形态与原代细胞相似,4～5天后,细胞汇合,细胞外形更趋于一致,呈平行排列。2细胞表面分子测定:已分离纯化后的细胞经流式细胞仪检测,细胞表面抗原CD44的表达阳性率91.23%,而CD34的表达阳性率1.35%,符合兔BMSCs的细胞表面特征。3BrdU标记:经BrdU标记的MSCs48h后标记率98%,并在6周时相点发现,移植的自体骨髓间充质干细胞成功参与了骨折的修复,BrdU对骨髓来源间充质干细胞起到较好的标记和“跟踪”作用。标本行免疫组织化学染色,可见成骨细胞及骨细胞的核均呈棕褐色,证实所移植的骨髓基质干细胞参与了新生骨的形成。4HE染色观察:治疗后2、6周各干预组成骨细胞和间充质细胞聚集增生活跃,骨小梁形成丰富,A组优于其他各组,10周时A、C组表现骨性愈合。而对照组一直表现为慢性炎症反应,纤维结缔组织增生,（略..）骨小梁形成少。5X线摄片观察结果:骨不连模型形成时,间隙平均变化为:5.78±0.98(mm)。治疗后2周时,A、B、C、D各组骨不连间隙变化分别为6.83±0.65,6.14±0.45,6.61±0.68,5.79±0.68。A组与B、D组比较均有统计学意义(P0.05),其中与D组P0.01,C组为与B组比较有统计学意义(P0.05);6周时,对照组与各实验组比较有统计学意义(P0.01),A组间隙变化为8.14±0.45与B、C组比较有统计学意义(P0.05);10周时,A组已达骨性愈合,骨不连间隙变化最大为9.86±0.26;B组为7.67±0.30,与A、C组(9.13±0.43)比较有统计学意义,A组优于C组。对照组与各实验组比较有统计学意义(P0.01),各实验组与治疗前比较均有统计学意义。各组各时相点骨痂生成量的多少的比较与骨不连间隙变化相吻合。6VEGF测定:在干预后的2周、6周时相点,干预组的VEGF阳性表达都强于对照组13.45±3.21(P0.01),A组VEGF阳性数分别为52.18±5.63,48.27±3.35均好于B、C组(P0.05);10周时,A、C组稳定表达VEGF,分别为:49.40±4.53,38.69±4.61,B组表达下降,但都好于对照组15.40±4.61(P0.01),C组好于B组(P0.05)。7四环素荧光标记情况:在干预后的2周、6周时相点,干预组都有明显的荧光标记迹象,发出明亮金黄色荧光,标记线较宽,可见清楚（此处忽略..）的骨小梁板层结构,A组、C组持续稍弱荧光在10周,A组好于C组。B组10周时则较6周时明显减弱,对照组在各时相点无荧光标记。各实验组MAR在2周时最大,分别为:4.53±0.12,3.11±0.08,3.64±0.17(um/d),显示结果与VEGF免疫组织化学染色相吻合。结论:ESWT结合自体BMSCs移植治疗骨不连缩短了治疗时间,提高了骨缺损处VEGF的表达和骨痂量的生成,更好的促进了骨折的愈合,优于ESWT治疗和自体BMSCs移植治疗。

以上为本篇毕业论文范文体外冲击波结合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究的介绍部分。

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