几丁质酶高产菌株的筛选及酶法制备几丁寡糖的研究

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几丁质酶高产菌株的筛选及酶法制备几丁寡糖的研究

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几丁质酶高产菌株的筛选及酶法制备几丁寡糖的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：本研究从海南儋州市海头镇、东方市新龙镇、乐东县黄流镇及文昌市清澜等地的水产养殖场,华南热带农业大学植物园、云月湖干涸湖底及掩埋过死虾的花池等地采集的土样中,通过平板分离法初筛得到348株菌株,再通过DNS法测菌株发酵液的酶活力复筛,获得了42株有一定几丁质酶活力的菌株,对这些菌株传代培养,并进一步分离纯化后测定酶活力,最后获得了5株高产几丁质酶活力的菌株。选择其中酶活力最高并且产酶稳定的菌株B22进行形态观察及其培养特征、生（文章此处忽略..）理生化特征鉴定和16SrDNA序列分析,鉴定该菌株B22为纤维黄链霉菌(Streptomycescelluloflavus)。通过单因素实验,初步确定了纤维黄链霉菌B22适宜产酶的培养基配方(g/L)及培养条件:蛋白胨2,酵母膏2,K2HP040.7,KH2P040.3,MgS04.7H200.5,FeSO4.7H2O0.01,细粉几丁质12,发酵培养基初始pH6.8,250mL三角瓶装70mL发酵培养基,3%的接种量,27℃,180r/min振荡培养,在72h～108h为产酶高峰期,96h酶活力达到最大的2585U/mL。纤维黄（此处忽略..）链霉菌B22可诱导出胞外的几丁质酶,通过60%饱和度的硫酸铵沉淀获得了比活力为9490的几丁质酶粗酶液,对其进行酶学性质研究,发现该酶最适作用温度为45℃,pH6.8,在50℃以上的温度条件下容易失活,在pH5.0～8.0具有较好的稳定性,Ca2+、Mg2+和Cu2+对该酶活力有一定的激活作用,而Fe3+和Zn2+则抑制几丁质酶活力。纤维黄链霉菌B22所产的几丁质酶不仅能降解胶态几丁质,对粉末几丁质和虾壳粉也有一定的降解活性,研究了该酶降解这三种底物反应体系中（文章此处忽略..）还原糖浓度随时间的变化、底物浓度对酶降解反应的影响及虾壳粉的不同预处理对酶降解反应的影响。5mL粗酶液与2%的胶态几丁质5mL反应5h,所产生的还原糖浓度达3.716mg/mL;30mL粗酶液与2g粉末几丁质反应,在2h达到了反应平衡,还原糖浓度为2.981mg/mL,30mL粗酶液与4g虾壳粉混合,反应12h还原糖含量达到最大,为2.547mg/mL,将虾壳粉短时高压(高压锅0.15MPa或者125℃,5min)处理后再超声波处理1h,降解反应体系中最大还原糖浓度达2.808mg/mL（此处忽略..）。每隔一段时间取反应液做薄层色谱分析,用异丙醇/H20/25%氨水(280:119:5.3)展开,显色剂显色后,表明它们都生成了几丁三糖。

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