两株海洋微藻中Δ4-脂肪酸去饱和酶基因和Δ5-脂肪酸延长酶基因的

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两株海洋微藻中Δ4-脂肪酸去饱和酶基因和Δ5-脂肪酸延长酶基因的

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两株海洋微藻中Δ4-脂肪酸去饱和酶基因和Δ5-脂肪酸延长酶基因的毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：球等鞭金藻(Isochrysissphaerica)和三角褐指藻(Phaeodactylumtricornutum)是两种非常重要的海洋微藻,它们是自然界中多不饱和脂肪酸(Polyunsaturatedfattyacids,PUFAs)的初级生产者,在PUFAs的商业化生产中具有很大的发展潜力。球等鞭金藻中富含二十二碳六烯酸(Docosahexaenoicacid,DHA),三角褐指藻中二十碳五烯酸(Eicosatetraenoicacid,EPA)含量很高。随着人们对DHA和EPA等PUFAs与人体健康的积极作用研究的不断深入,这两种海洋微藻越来越引起人们的重视。本文以这两种海洋微藻为研究材料,针对环境因子对球等鞭金藻生（略..）长和脂肪酸组成的影响,海洋微藻中与DHA合成相关基因的克隆和功能验证,基因共表达等内容开展了研究,得到了如下一些结果:(1)测定了光照强度为16~58μmol/(m~2·s)和15~30℃条件下球等鞭金藻的生长曲线以及脂肪酸组成和含量。结果表明,在设置的光强范围内,光照强度越强,微藻的生长速度越快。光照强度对各种脂肪酸的含量影响有差异,光强过低和过高都不利于藻体内总不饱和脂肪酸(Totalunsaturatedfattyacids,TUFAs)的积累。当光照强度为24μmol/(m~2·s)时DHA的积累量最高,占总脂肪酸的11.77%。球等鞭金藻的最适生长温度在20~25℃之间,低温条件有利于TUFAs的积累。光强为24μmol/(m~2·s)、温度为20℃条件下TUFAs（文章此处忽略..）含量最高,达64.99%;同样的光强,温度为15℃条件下DHA占总脂肪酸的12.19%。(2)利用简并PCR、基因组步移以及RT-PCR等方法,从球等鞭金藻中克隆到Δ4-脂肪酸去饱和酶基因,命名为isfad4。isfad4全长1284bp,编码427个氨基酸,推测的多肽序列具有典型的脂肪酸去饱和酶保守结构域,包括一个细胞色素b5结合域和三个组氨酸簇。将isfad4转化到毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中,外源添加底物进行发酵培养后分析转化子的脂肪酸组成。结果表明isfad4在毕赤酵母中获得了高效表达,重组菌株对外源底物的转化效率达到了79.8%。(3)从已知序列的未知基因片段出发,通过延伸引物的方法从三角褐指藻中克隆到Δ5-脂肪酸延长酶基因,命名为ptfae5。ptf（略..）ae5全长1110bp,编码369个氨基酸,推测的多肽序列具有Δ5-脂肪酸延长酶典型的组氨酸保守结构域和内质网结合域。将ptfae5转化到毕赤酵母中,外源添加底物进行发酵培养后分析转化子的脂肪酸组成。结果表明,ptfae5在毕赤酵母中获得了高效表达,重组菌株对EPA转化为二十二碳五烯酸(Docosapentaenoicacid,DPA)的转化率为91.8%,将花生四烯酸(Arachidonicacid,ARA)转化为二十二碳四烯酸(Adrenoicacid,DTA)的转化率为81.1%。将ptfae5截短后转化到毕赤酵母中,分析辅助区部分缺失对酶活的影响。结果表明,N端辅助区的部分缺失不会改变Δ5-脂肪酸延长酶对底物的特异性,但是辅助区的缺失酶会降低该酶的（本文此处忽略..）活性。(4)利用isfad4和ptfae5,构建了毕赤酵母共表达载体pAOd4e5。将pAOd4e5转化到毕赤酵母GS115中,外源添加底物的条件下对isfad4和ptfae5进行共表达研究。结果表明,isfad4和ptfae5在毕赤酵母中都获得了高效表达,重组菌株对EPA和DPA(n-3)的转化效率为90.8%,对ARA和DTA的转化率分别为83.2%和90.9%。

以上为本篇毕业论文范文两株海洋微藻中Δ4-脂肪酸去饱和酶基因和Δ5-脂肪酸延长酶基因的的介绍部分。

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