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大豆隐花色素基因的酵母双杂交分析

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毕业论文范文题目：大豆隐花色素基因的酵母双杂交分析，论文范文关键词：大豆隐花色素基因的酵母双杂交分析
大豆隐花色素基因的酵母双杂交分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：隐花色素(cryptochrome)是吸收蓝光和近紫外光而调节植物形态、新陈代谢变化以及向光反应的一类光敏受体。隐花色素广泛存在于生物界中,研究证明许多植物的隐花色素是分子量为70-80kD的蛋白质,有两个可识别区域:一个是与光解酶有同源序列的N端PHR(photolyaserelated),但不具有光解酶的DNA修复活性;另一个是光解酶不具有的C端延伸区,C端是蛋白-蛋白结合区,具（略..）有保守性,也是蓝光信号得以向下游传递的延伸区域。蓝光信号转导涉及隐花色素与其他蛋白质间直接或间接的相互作用。目前,许多植物的隐花色素基因已相继被分离和初步鉴定。中国农业科学院作物科学研究所613室克隆了大豆两个隐花色素基因并对其功能作了初步的分析。酵母双杂交是体内研究蛋白质相互作用的新方法。为进一步研究这两个基因的功能及下游信号传导机制,本试验对这两个基因作了酵母双杂交分析（此处忽略..）。首先用PCR及酶切、连接的方法构建了两个基因的N端、C端及全长的酵母双杂交诱饵载体:pGBKT7-CRY1N、pGBKT7-CRY1C、pGBKT7-CRY1Q、pGBKT7-CRY2N、pGBKT7-CRY2C、pGBKT7-CRY2Q。分别与空的AD载体pGADT7组合转入酵母菌株AH109进行自激活检测,结果表明只有pGBKT7-CRY2N+ppGADT7能激活报告基因的表达,因此重组质粒pGBK（文章此处忽略..）T7-CRY2N不能用于酵母双杂交分析。其次,用pGBKT7-CRY1C作为诱饵,筛选了大豆酵母双杂cDNA文库。用醋酸锂转化法将诱饵和文库质粒先后转入酵母菌株AH109后,经SD/-Leu-Trp培养基扩增,然后鉴定转化子对HIS3、ADE2、lacZ三个报告基因的激活情况,初步获得了17个能同时激活三个报告基因的阳性克隆。对阳性克隆进行了PCR和测序分析,序列分析的结果表明其中5个克隆含（文章此处忽略..）有正确的读码框,同源性分析表明其中4个是与光系统中基因同源的序列。最后将来源于大肠杆菌这五个克隆的质粒与诱饵质粒pGBKT7-CRY1C组合重新转回酵母细胞AH109中作了进一步的验证,结果表明五个基因与大豆隐花色素基因CRY1的C端有相互作用的可能性,但结果有待于进一步验证。

以上为本篇毕业论文范文大豆隐花色素基因的酵母双杂交分析的介绍部分。

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