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新型cry2基因克隆、表达及活性分析

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毕业论文范文题目：新型cry2基因克隆、表达及活性分析，论文范文关键词：新型cry2基因克隆、表达及活性分析
新型cry2基因克隆、表达及活性分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：本研究从两株Bt菌株出发,对新型的cry2类基因进行了研究。SBT2菌株是一株从海南省玉泉山土壤样品中分离出的一株新Bt菌株,经鉴定含有cry2Ad基因,该基因的活性至今未见报道。SC6H8菌株是一株从福建省武夷山土壤样品中分离的Bt菌株,生物活性测定结果表明该菌株对Cry1Ac抗性和敏感的棉铃虫均具有明显的体重抑制作用,说明该菌株所含杀虫基因与cry1Ac可能不具有交互抗性,经鉴定含有cry2类新基因。本研究对这两株菌的新型cry2类基因进行了克隆、表达和活性分析。对野生菌株SBT2进行了晶体形态、质粒图谱和蛋白分子量分析,结果表明SBT2产生分子量约130kDa、大小不一的双锥体形晶体（略..）蛋白,所含有的质粒带型与B.thuringiensissubsp.kurstakiHD-1相比,两者所含大质粒相似,而小质粒差异较大。对该菌株进行了PCR-RFLP鉴定,发现该菌株含有cry1Aa、cry1Da、cry1Hb、cry1Jb、cry1Ka、cry1Ib和cry2Ad基因。克隆了其中的cry2Ad基因,在NCBI上应用BLAST软件比较相似性显示,来自SBT2菌株的Cry2Ad与已知的Cry2Ad1的相似性最高(达99%),属于第四等级的新基因。通过实验室构建的高效原核表达载体pEB成功表达了cry2Ad基因,表达产物生物活性测定结果显示,Cry2Ad对棉铃虫(Helicoverpaarmi（略..）gera),玉米螟(Ostriniafurnacalis),小菜蛾(Plutellaxylostella)和舞毒蛾(Lymantriadispar)活性较低,对大猿叶甲(Colaphellusbowringi)无活性。对野生菌株SC6H8进行的晶体形态、质粒图谱和蛋白分子量分析显示,SC6H8产生小双锥体形状的晶体蛋白,在130kDa和60kDa都有蛋白条带,所含质粒比HD-1丰富。对该菌株进行了PCR-RFLP鉴定,结果显示该菌株含有cry1Aa、cry1Ba、cry1La、cry1Ia、cry2Aa、cry2Ab和新型cry2基因。克隆了其中的新型cry2基因,在NCBI上应用BLAST软件比较同源性显示,此C（文章此处忽略..）ry2Ax与已知的Cry2Ab8的相似性最高(达93%),属于第三等级的模式基因。通过pET21b表达载体成功表达了cry2Ax基因,表达产物生物活性测定结果显示,Cry2Ax对棉铃虫和玉米螟有较好的体重抑制效果,IC50分别为8.70ug/ml和9.23ug/ml。对经Cry1Ac筛选的抗性棉铃虫IC50为13.96ug/ml。Cry2Ax对小菜蛾和大猿叶甲无活性。Cry2Ax是我国同时获得的两个cry2模式基因,三维结构分析显示,Cry2Ax与已知的Cry2A蛋白一样具有典型的三个结构域。与Cry2Ab的碳骨架比较显示,Cry2Ax的碳骨架与Cry2Ab的碳骨架除355位脯氨酸(Pro)存在差异外,其余部分的碳骨架完全一致。利用重叠PC（此处忽略..）R获得Cry2Ax的两个定点突变体:Cry2Axv354-sp和Cry2Axv354-vp。通过pET21b表达载体成功表达了cry2Axv354-sp和cry2Axv354-vp基因,表达产物生物活性测定结果显示,Cry2Axv354-sp和Cry2Axv354-vp对小菜蛾无活性,对棉铃虫的IC50分别为1.632ug/ml和5.683ug/ml。

以上为本篇毕业论文范文新型cry2基因克隆、表达及活性分析的介绍部分。

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