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柑橘鳞皮病毒的RT-PCR检测技术研究

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毕业论文范文题目：柑橘鳞皮病毒的RT-PCR检测技术研究，论文范文关键词：柑橘鳞皮病毒的RT-PCR检测技术研究
柑橘鳞皮病毒的RT-PCR检测技术研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：柑桔鳞皮病毒(Citruspsorosisvirus，CPV)属蛇形病毒属(Ophiovirus)，是一种多分体单链RNA病毒，主要分布于阿根廷、巴西、意大利、西班牙以及美国等国家，对柑桔产业造成十分严重的为害。该病害可以随种子、苗木等繁殖材料的调运进行远距离传播，鉴于目前我国大量引进国外优良柑桔品种，存在着将柑桔鳞皮病传入我国的风险，所以迫切需要建立一种快速、准确的CPV检测方法，该方法的建立对加强检疫、保障我国柑桔产业不受该外来重大（略..）植物病害的危害，保持我国柑桔产业的可持续发展显得尤为重要。目前国外对CPV的检测方法主要有指示植物鉴定、血清学检测、分子杂交检测以及反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)等，而国内迄今还未见相关的研究报道。本研究通过对中国农业科学院柑桔研究所保存的CPV毒源进行研究，比较筛选了一种微量快速总核酸提取方法，建立起快速、灵敏、特异性的CPVRT-PCR检测方法，并对Dweet桔橙病株上不同部位CPV的全年分布进行了检测，主要结论如下：1．（此处忽略..）比较分析了浸泡法、Trizol法和微量快速提取法在内的3种总核酸提取方法，结果表明：浸泡法提取液中A_(260)／A_(280)平均值为1.26，并且RT-PCR效果差；Trizol法提取液中A_(260)／A_(280)程序较0平均值为1.77，RT-PCR效果好，但提取操作复杂，不适合大批量样品RNA的快速制备；微量快速提取法提取液中A_(260)／A_(280)平均值为1.89，PCR效果好，并且提取速度快、取样量少，适用于大批量样品RNA的快速制备。2．进行了常规RT-PCR和一步法RT-PCR的优化实（略..）验。对常规RT-PCR进行了退火温度、Mg~(2+)浓度、引物浓度的优化，最终可以检测出病株中的CPV，但是结果中仍有非特异性条带；对一步法RT-PCR试剂盒进行比较，结果表明SuperScriptOne-StepRT-PCR试剂盒扩增出的条带清晰，无非特异性条带产生，适合CPV的RT-PCR检测；再对该方法进行优化，优化后的一步法RT-PCR方法灵敏度高，特异性强。3．运用一步法RT-PCR对嫁接接种CPV的Dweet桔橙、Symon（文章此处忽略..）s甜橙、新生3号椪柑、邓肯葡萄柚、尤里克柠檬和强德勒柚等病株进行检测，均能检测到CPV，可见，一步法RT-PCR适合于不同柑桔品种的CPV检测。4．从2005年5月到2006年4月逐月采样，运用一步法RT-PCR检测CPV在Dweet桔橙苗木叶片和枝皮中的分布，同时记录月平均温度。结果表明，保存在温室中的Dweet桔橙病

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