亚洲棉短绒突变体相关基因的克隆及表达分析

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亚洲棉短绒突变体相关基因的克隆及表达分析

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毕业论文范文题目：亚洲棉短绒突变体相关基因的克隆及表达分析，论文范文关键词：亚洲棉短绒突变体相关基因的克隆及表达分析
亚洲棉短绒突变体相关基因的克隆及表达分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：棉花长纤维和短绒的分化发育直接影响着纤维的产量和品质,长期以来,人们关注的主要是长纤维的分子发育机理,而短绒的研究很少被重视。通过对棉花短绒的研究,有利于揭示长纤维和短绒发育的互作机制,系统了解棉花种子表皮毛发育的分子机理,进而有助于我们充分利用棉花自身的基因资源对棉纤维品质及产量进行遗传改良。基因芯片是近年来兴起的一种可以从整体水平上认识基因相互间的网络关系、研究代谢机制、探索基因表达差异的技术,有助于重要基因的发现。本研究以亚洲棉DPL971及其光子突变体DPL972为材料,利用cDNA芯片技术筛选与短绒分化发育相关的基因,并对从中（此处忽略..）筛选出来的一对同源基因GaMYB23和GaMYB23m进行了深入的研究。主要研究结果包括:(1)通过cDNA芯片筛选出亚洲棉胚珠早期发育时期(-3DPA、0DPA、+3DPA、+5DPA、+7DPA)的差异基因1779个,与拟南芥数据库相结合,筛选得到8个与拟南芥表皮毛发育相关的同源基因。应用RT-PCR技术对其中5个差异表达基因进行了验证,结果显示,运用基因芯片筛选差异表达基因存在一定的假阳性问题,部分基因的表达并不完全与芯片结果一致,但总体来说芯片结果是可信的。(2)对同源基因GaMYB23和GaMYB23m进行RT-PCR和QRT-PCR验证,结果显示,与突变体DPL972相比（此处忽略..）较,该基因在野生型DPL971中表达量普遍较低,且在+1DPA,+3DPA,+4DPA这几个时期差异最显著,尤其在+3DPA该基因在野生体中几乎被抑制,与芯片Ratio值结果相符。在QRT-PCR中,该基因在0DPA和+3DPA差异最显著,表达变化趋势和芯片结果在这几个时期大致也相同。根据表达量变化,推测该基因与棉花短绒发育相关。(3)运用RACE技术和GenomeWalker技术扩增获得GaMYB23m基因的cDNA全长为621bp,预测的蛋白质序列含有206个氨基酸残基,推测分子量为50.98KDa,通过比对分别从DPL971和DPL972中克隆获得的GaMYB23和GaMYB23m基因（文章此处忽略..）,发现在cDNA序列中共有两处碱基替换,其中的一处碱基替换位于GaMYB23编码蛋白的28位上,由野生型GaMYB23中相同位置的非极性甘氨酸(G)突变成极性精氨酸(R),该点处于MYB保守区,对造成蛋白质结构与功能的改变有一定作用。(4)将具有MYB保守区的一些与表皮毛发育相关的蛋白进行聚类分析,结果发现GaMYB23蛋白和GaMYB23m蛋白序列关系最近,且与GhMYB1~GhMYB6相比,GaMYB23和GaMYB23m蛋白序列与GL1、AtMYB23、AtWER、GaMYB109的蛋白序列关系更近。GL1、AtMYB23、AtWER在拟南芥表皮毛的分化发育中起重要作用,因此推断G（略..）aMYB23蛋白在短绒分化发育过程中也有一定的作用。(5)为了更深入了解MYB保守区,我们设计引物对该区段进行了Southern杂交分析,结果发现在DPL971和DPL972中,GaMYB23基因在基因组中并没有明显的差异,且该保守区序列在基因组中存在多个拷贝,说明该保守区在棉花的发育和代谢过程中发挥着多种不同的作用。

以上为本篇毕业论文范文亚洲棉短绒突变体相关基因的克隆及表达分析的介绍部分。

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