丙型肝炎病毒E2 N-糖基化对免疫功能的影响及与分子伴侣的彼此作

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丙型肝炎病毒E2 N-糖基化对免疫功能的影响及与分子伴侣的彼此作

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毕业论文范文题目：丙型肝炎病毒E2 N-糖基化对免疫功能的影响及与分子伴侣的彼此作，论文范文关键词：丙型肝炎病毒E2 N-糖基化对免疫功能的影响及与分子伴侣的彼此作
丙型肝炎病毒E2 N-糖基化对免疫功能的影响及与分子伴侣的彼此作毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：丙型肝炎病毒(HepatitisCVirus，HCV)基因组编码两个包膜(Envelope，E)糖蛋白：E1跟E2。E1跟E2都是高度N-糖基化的糖蛋白。病毒糖蛋白上的糖链是机体细胞辨认、结合的靶分子，并且存在对糖蛋白构造调节的特点。病毒的糖链还存在保护、牢固病毒构造的完全性以及构成屏障以抵抗外物的侵入的功能。N-糖基化有很多作用，如影响免疫分子的折叠、成熟、包装、投送、定位以及牢固，影响T细胞的功能，影响体液免疫的功能，对体液免疫跟细胞免疫应答强弱的调节等，然而，N-糖基化作用对HCV感染机体的影响却知之甚少。为了研究HCVE2糖基化是否会影响病毒蛋白的合成、装配，以及它对机体免疫应答的作用，本文利用定点渐变的PCR技巧构建E2的三个重要的糖基化位点的渐变体，N177NT，N193ST，N177NT／N193ST，采取高保真性的pfxDNApolymerase进行定点渐变，使AAC编码的天冬酰氨(-Asn-)渐（文章此处忽略..）变为TAC编码的酪氨酸(-Tyr-)，使得N-糖基化位点-NNT-，-NST-渐变为-YNT-，-YST-。咱们用野生型E2以及糖基化位点渐变型E2的DNA作为DNA疫苗来进前进一步研究，因为DNA疫苗研究中独特存在的一个问题是免疫持续时光有限，为了保持幻想的免疫后果，须要反复打针DNA或者辅以佐剂。本研究利用丙型肝炎包膜糖蛋白E2的野生型以及不同的糖基化位点渐变体E2的DNA(100μg／100μl／只)对BalB／C小鼠进行DNA免疫打针，并设破生理盐水空白对比组，以及空载体pcDNA3.1(-)阴性对比组，单独或结合打针佐剂IL-2。打针部位为小鼠双侧后腿股四头肌内侧，总共免疫三次，每次间隔十天，根据已有的文献报道，HCV包膜糖蛋白E2对小鼠的免疫是在首次免疫后50天左右进入抗体产生的顶峰，所以，本实验在末次免疫之后的四处，取小鼠眼球静脉血，用间接ELISA方法检测免疫实验动物体内特异性抗体产生情况以及（略..）产生抗体的滴度程度；收集的静脉血经过肝素抗凝之后，用流式细胞仪(flowcytometer，FCM)检测免疫小鼠外周血中CD4~+，CD8~+T淋巴细胞的变更；无菌取小鼠脾脏，并于37℃，5％CO_2培养，收集经过ConA(10mg／ml)引诱的脾细胞培养72小时的上清液，分辨用小鼠IFN-γ跟IL-4检测试剂盒测定上清中IFN-γ跟IL-4的分泌程度并进行比较;为了初步摸索EZ的糖基化与分子伴侣之间的彼此关联，分辨将野生型跟不同的渐变型EZ跟内质网分子伴侣钙联蛋日(calnexin，CNX)的重组DNA共转染真核细胞Hela，用激光显微共聚焦(eo响eallasermieroseopy)来察看它们在细胞内的定位。研究成果显示，咱们成功构建两个单位点渐变体以及一个双位点渐变体;并将野生型EZ连接到原核表白载体pGEX一KG上，并且将野生型/渐变型EZ连接到真核表白载体peDNA3.l(一)侧yc一HisB上;免（略..）疫小鼠的实验成果表明，野生型以及糖基化位点渐变型EZ可能引诱特异性的体液免疫，产生特异性的抗体，抗体滴度程度不一致，从1:100一1:800，其中N193ST(EZ一MZ)在免疫应答方面绝对野生型及其余的渐变体不仅仅是引起血清转阳率的降落，而且IgG抗体程度也明显降落;发明了渐变型及野生型EZ都能引起小鼠CD4+T细胞数量的增加，然而EZ一MZ所引起的CD4+T细胞数量的增加也低于其余的组别，各组之间对CDS+T细胞数量的影响并无明显差别;并对脾细胞分泌上清中细胞因子的程度进行比较，发明DNA免疫组能刺激IFN一Y的分泌，程度较对比组别高，差别有明显性，EZ一MZ引起的改变也略微低于其余实验组，而IL一4的分泌程度的成果显示各组别之间不明显差别，这初步显示，DNA疫苗引诱Thl型占上风的细胞免疫应答;将野生型以及渐变型EZ与CNX独特转染Hela细胞的成果显示，E2跟CNX在内质网中可能共表白跟共定（此处忽略..）位，提示了两者之间的彼此作用。本研究成果首次揭示了HCV包膜糖蛋白EZ的糖基化在机体对病毒的免疫应答中起到非常重要的作用，尤其是EZ抗原中的N193ST糖基化位点是B细胞跟CD4+T细胞辨认的重要的糖特异性抗原表位，此糖基化位点的糖链可能通过影响EZ的空间构型从而对EZ的体液免疫跟细胞免疫产生影响:仅改变一个位点就未能或仅能引起较低的抗体程度、仅能刺激CD4+T数量的略微增加、对I刚令的影响也低于其余实验组;本研究同时也表明，蛋白糖基化与免疫体系有着密切的关联，为病毒感染引起免疫应答改变的分子机制提供了非常重要的线索，为进一步阐明HCV包膜糖蛋白的功能以及HCV新型疫苗的研究奠定了基石出。

以上为本篇毕业论文范文丙型肝炎病毒E2 N-糖基化对免疫功能的影响及与分子伴侣的彼此作的介绍部分。

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