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小熊猫成纤维细胞系的树破、冷冻保存及异种重构胚构建

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毕业论文范文题目:小熊猫成纤维细胞系的树破、冷冻保存及异种重构胚构建,论文范文关键词:小熊猫成纤维细胞系的树破、冷冻保存及异种重构胚构建
小熊猫成纤维细胞系的树破、冷冻保存及异种重构胚构建毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:小熊猫是一种濒危野活泼物,其进化史在高等肉食类类熊科动物的进化中表演侧重要的角色,其在动物分类学、体系进化学及生态学等范畴都存在非常重要的研究价值。为了在细胞程度上长期保存小熊猫这一珍稀物种,同时也为构建小熊猫异种克隆胚提供供体细胞,本研究采集一5岁雌性小熊猫耳组织,以低糖DMEM为基本液,增加20%FBS作为原代细胞培养液,增加10%FBS作为传代细胞培养液,利用组织块(略..)培养法培养小熊猫成纤维细胞到10代;同时在基本培养液中增加20%FBS、8%DMSO作为冷冻保护剂,以4℃均衡30min、-80℃冰箱过夜、最后投入液氮作为冷冻程序,对小熊猫成纤维细胞进行了冷冻保存。本研究成功的树破了小熊猫成纤维细胞系,察看成果表明细胞状况与成长发育情况良好;冷冻保存的第三代细胞解冻后再培养,其成长曲线合乎贴壁细胞的成长法则,培养至96h时,细胞贴壁率达到100%。为获得构(本文此处忽略..)建小熊猫异种重构胚所需的卵母细胞,本研究采取超数排卵技巧对日本大耳兔进行超数排卵,并比较了不同超数排卵打算的后果。成果表明,四种不同剂量组合的“eCG肌肉打针+hCG静脉打针”的兔超数排卵打算的均匀获卵数差别明显,而获得的可用卵数(MⅡ期卵母细胞)差别不明显,其中以eCG120IU、hCG180IU超排后果最好,均匀可获卵16.3枚,MⅡ期卵母细胞率达97.3%。为探讨小熊猫-兔异种克隆的(此处忽略..)可能性,本研究以解冻的小熊猫成纤维细胞为供体免得卵母细胞为受体,通过核移植构建了194枚小熊貓-兔异种重构胚,对重构胚进行电融合、激活跟培养。融合参数:两次140v/mm、80μs的直流电脉沖,间隔1s;激活方法:5μM离子霉素4~5min、2mM6-DMAP4h;培养液:HTF。同时以25枚打针小熊猫体细胞后的兔卵母细胞不经过融合而直接激活作为对比。成果显示:实验组小熊猫-兔异种重构胚,有137枚决(文章此处忽略..)裂,卵裂率70.61%;有64枚发育到桑椹胚,桑椹胚率46.72%:有31枚发育到囊胚,囊胚率22.63%;对比组仅有1枚决裂并发育到桑椹胚,其卵裂率极明显地低于实验组。成果表明:兔卵母细胞胞质可能支撑小熊猫成纤维细胞核子的重编程及进一步的胚胎发育。


以上为本篇毕业论文范文小熊猫成纤维细胞系的树破、冷冻保存及异种重构胚构建的介绍部分。
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