猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性研究

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猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性研究

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毕业论文范文题目：猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性研究，论文范文关键词：猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性研究
猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：疫苗免疫接种是控制猪传染病的重要手段,但由于疫苗自身的缺点以及免疫抑制病的发生而带来的疫苗免疫失败、免疫保护率低等情况时而发生[1~2]。因此,提高疫苗的免疫力和免疫保护效果对控制猪传染病具有重要意义。细胞因子作为免疫佐剂可以提高疫苗的免疫效果、增强动物机体的免疫力,因此细胞因子作为免疫增强剂的研究成为目前研究的热点。白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-2)分别属于Th1、Th2型细胞因子,介导细胞免疫与体液免疫。大量研究表明,IL-2、IL-6可以作为免疫佐剂增强疫苗的免疫效果。为探讨IL-2/IL-6用作疫苗佐剂的协同免疫增强作用机理及效果,研究高效猪基因工程免疫增强剂获得一种能够平衡Th1和Th2应答的新型、高效的免疫增强剂。本研究从LPS脂多糖刺激过的猪脾脏细胞中提取PoIL-6RNA,进一步构建rpQE-30/PoIL-6原核表达质粒,对其原核表达的蛋白进行纯化,研究其生物学活性及对脾（此处忽略..）脏细胞的增殖活性。然后采用重叠延伸PCR(splicingbyoverlapextension-PCR,SOE-PCR)技术将猪白介素-2成熟肽基因(PoIL-2)和猪白介素-6成熟肽基因(PoIL-6)构建成重组嵌合基因(PoIL-2-linker-PoIL-6)并克隆入pGEM-Teasy克隆载体;将含PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因的重组克隆阳性质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切后与经同样酶切的原核表达载体pQE30粘端连接,筛选阳性重组表达质粒在E.Coil中进行表达。对表达的重组融合蛋白(rPoIL-2-linker-PoIL-6)通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化并进行蛋白含量测定。分别检测rPoIL-6、rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白与抗PoIL-2、PoIL-6单抗发生特异性免疫反应及促猪外周血T淋巴细胞、猪脾脏细胞的增殖活性的活性。结果表明:成功克隆（文章此处忽略..）了rPoIL-6成熟肽基因,基因全长573bp;并构建成功rpQE-30/PoIL-6原核表达质粒,其在大肠杆菌系统中表达的rPoIL-6蛋白分子量大小约为20KD;经纯化后的蛋白质纯度在95%以上;rPoIL-6蛋白能和抗PoIL-6单抗发生特异性反应,MTS法检测得出,rPoIL-6蛋白活性为1.23x106UI/mg,具有促进猪脾脏细胞的增殖活性。成功构建了PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因及其重组原核表达质粒rpQE-30/PoIL-2-linker-PoIL-6;表达的rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白经纯化后纯度在96%以上。rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分别可与抗PoIL-2、PoIL-6单抗发生特异性免疫反应,并可显著促进猪外周血T淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖。rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白促猪外周血T淋巴细胞和脾脏淋巴细胞增殖活性也与浓度呈现相关性,相对而言,rPoIL（文章此处忽略..）-2-linker-PoIL-6和rPoIL-2蛋白对照具有明显促猪外周血T淋巴细胞增殖所需要的最低浓度较高(最大稀释度分别为1:256,0.598ug/mL;1:512,0.322ug/mL),且rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白的促增殖活性稍优于相同稀释度的rPoIL-2蛋白对照。与IL-2的促外周血T细胞增殖活性所需要的蛋白剂量不同,极低浓度(最大稀释度1:214)的rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白、rPoIL6蛋白和rhIL-6蛋白即可刺激猪脾脏淋巴细胞的增殖;相对而言,rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白的促猪脾脏淋巴细胞增殖活性稍优于rPoIL-6蛋白对照,但二者均稍低于rhIL-2标准品。这表明rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白在动物体外具有单rPoIL-2、rPoIL-6蛋白叠加的生物学活性,且其活性可能优于两种单rPoIL-2、rPoIL-6蛋白混合应用。本研究成功构建了rpQE-30/PoI（本文此处忽略..）L-6原核表达质粒、PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因及其重组原核表达质粒(rpQE-30/PoIL-2-linker-PoIL-6)。表达的rPoIL-6蛋白能和抗PoIL-6单抗发生特异性免疫反应,且具有促进猪脾脏细胞的增殖活性。rPoIL-2-linker-PoIL-6融合蛋白能够显著的促进猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖,且在体外具有单rPoIL-2和rPoIL-6蛋白的双重生物学活性,为下一步进行rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白在动物体内活性研究奠定了基础。

以上为本篇毕业论文范文猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性研究的介绍部分。

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