金黄色葡萄球菌肠毒素B定点突变体活性的研究

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金黄色葡萄球菌肠毒素B定点突变体活性的研究

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毕业论文范文题目：金黄色葡萄球菌肠毒素B定点突变体活性的研究，论文范文关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B定点突变体活性的研究
金黄色葡萄球菌肠毒素B定点突变体活性的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：金黄色葡萄球菌肠毒素B（StaphylococcalenterotixnB,SEB）是金黄色葡萄球菌分泌的一种可溶性蛋白质,属革兰氏阳性热源外毒素，也是一种重要的细菌超抗原。因此微量的SEB就可非特异性地激活5-20%的T细胞，释放大量的细胞因子，促进CTL细胞成为效应细胞并激活NK细胞，从而产生强大的抗肿瘤效应。但由于SEB具有较大的毒副作用，容易导致人和动物伪膜性小肠炎、大肠炎，引起呕吐、腹泻，甚至死亡[2]。为了研究SEB结构中的组氨酸与其毒性的关（略..）系，减轻并消除SEB的毒性作用，促进SEB在肿瘤治疗的临床应用。为此，我们通过PCR定点突变技术，在SEB三维结构的基础上，用其它氨基酸替代SEB的组氨酸，构建六个SEB突变体，并通过一系列实验检测各种突变体蛋白的活性。从而筛选出毒副作用较小、超抗原活性较好的突变体。本实验主要包括两个部分：1.突变体蛋白的获得通过引物设计及PCR定点引入H12、H32、H105、H121四个突变位点，形成六个突变体：SEB-H12D/H32D、SEB-H105D/H21D、SEB-H12D/H32D/H105D/（略..）H121D、SEB-H32D、SEB-H32Q、SEB-H32L。将PCR扩增的突变DNA片段与pET32a原核表达载体连接，构建成6个重组表达质粒，诱导表达并得到高纯度的突变体蛋白。2.突变体蛋白的活性检测通过对肿瘤细胞的抑制实验，脾淋巴细胞增殖实验以及MHCⅡ亲和实验，初步检测突变体蛋白的超抗原活性；然后通过幼猫催吐实验检测突变体蛋白的毒性，用小鼠致死实验检测突变体蛋白在体内的超抗原活性作用。在此研究中，我们成功地定点引入了突变位点并构建了突变体的原核表达质粒，得到（此处忽略..）了高纯度的SEB突变体蛋白（纯度95%）。肿瘤细胞的抑制实验和鼠脾增殖实验结果表明：各突变体仍然具有刺激淋巴细胞增殖的能力，并保持了对肿瘤细胞的抑制作用，但与对照组（野生型SEB）相比有所降低。MHCⅡ亲和力实验证明：各突变体蛋白与MHCⅡ类分子均具有较高的亲和力，其中四位点突变体(AB)与MHCⅡ类分子结合的荧光强度为220.32，比野生型SEB荧光强度高了一倍；而突变体C3的亲和力却比野生型SEB低了一倍，荧光强度为52.33。催吐实验显示：各突变体蛋白均没有引起实验动（略..）物的呕吐、腹泻中毒症状。致死实验表明：所有突变体对小鼠的致死性都有不同程度的降低，尤其是四位点突变体AB（致死率为50%），其致死性比野生型SEB低了一倍；突变体C3具有较高的致死性，但与阳性对照组相比无差异。WP=8总之，上述实验表明：SEB结构中的组氨酸被替代后毒性明显减弱，但其T细胞刺激活性也受到不同程度的影响。

以上为本篇毕业论文范文金黄色葡萄球菌肠毒素B定点突变体活性的研究的介绍部分。

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