肝片吸虫重组GST、CatL蛋白及其DNA核酸联合免疫初步研究

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肝片吸虫重组GST、CatL蛋白及其DNA核酸联合免疫初步研究

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毕业论文范文题目：肝片吸虫重组GST、CatL蛋白及其DNA核酸联合免疫初步研究，论文范文关键词：肝片吸虫重组GST、CatL蛋白及其DNA核酸联合免疫初步研究
肝片吸虫重组GST、CatL蛋白及其DNA核酸联合免疫初步研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：肝片吸虫病是由肝片形吸虫(Fasciolahepatica)寄生于牛、羊等反刍动物肝脏胆管内引起的一种对动物危害十分严重的吸虫病。目前,该病主要依靠药物治疗,然而长期用药不仅可产生抗药性而且会造成环境污染,因此,疫苗研制成为该病防治的热点。国内外研究发现,谷胱甘肽S-转移酶(GST)和组织蛋白酶L(CatL)对抗肝片吸虫感染均具有免疫保护作用,并且在肝片吸虫病分子疫苗研制中显现出良好的应用前景。因此,本研究拟制备GST和CatL基因的重组蛋白及其DNA核酸,免疫大鼠分析其免疫原性。本研究以肝片吸虫总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增了GST和CatL基因。分别（文章此处忽略..）克隆入pMD18-T载体并转化到TG1宿主菌中,获得阳性重组质粒pMD18-T-GST和pMD18-T-CatL,测序结果与GenBank中已知核苷酸序列同源性分别为98.8%和97.6%。进一步亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,获得阳性重组质粒pET30a-GST和pET30a-CatL,重组菌株经IPTG诱导,融合蛋白获得了高效表达。经Westernblotting检测,重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清及抗肝片吸虫山羊血清识别,证实GST和CatL重组蛋白均具有良好的免疫原性。再利用PCR方法扩增获得GST和CatL基因,分别连接到真核表达载体pE（文章此处忽略..）GFP-N1上,构建重组质粒pEGFP-GST和pEGFP-CatL,荧光显微镜下观察到转染重组质粒的Hela细胞显现绿色荧光,Westernblotting结果进一步证实重组质粒在体外获得表达。将80只SD大鼠随机分成8组,分别为GST和CatL重组蛋白免疫组,GST和CatLDNA核酸免疫组,GST和CatLDNA核酸作基础免疫再用相应的重组蛋白加强免疫的“prime-boost”联合免疫组,pEGFP-N1空载体对照组和PBS对照组。每只鼠免疫三次,每次间隔3周。于免疫前(0周)和第一次免疫后第3、6、9、12、15周取大鼠采血,应用间接ELISA方法检测血清中IgG抗体水平,（此处忽略..）结果显示,与对照组相比,各免疫组从第3周开始IgG抗体滴度均有不同程度的提高,其中GST和CatL重组蛋白免疫组抗体水平始终高于其它免疫组,且在第9周抗体水平达至最高(1:102400),第12周开始下降;GST和CatLDNA核酸免疫组抗体水平一直缓慢上升,“prime-boost”联合免疫组用重组蛋白加强免疫后,抗体水平迅速上升。证实重组蛋白诱导的体液免疫应答反应明显高于DNA核酸,但DNA核酸在大鼠体内发挥作用的时间更长。应用MTT法检测第11周大鼠T淋巴细胞转化效果,结果显示,各免疫组平均刺激指数显著高于空载体对照组和PBS对照组(p0.05),其中GST重组蛋白免疫组、CatL重组（略..）蛋白免疫组、GST联合免疫组和CatL联合免疫组间淋巴细胞刺激指数差异不显著(p0.05),但与GSTDNA核酸免疫组和CatLDNA核酸免疫组相比较差异均显著(p0.05)。说明与DNA核酸单独免疫比较,重组蛋白免疫和DNA核酸/重组蛋白联合免疫更能有效促进大鼠脾淋巴细胞的生长和增殖。两种疫苗联合免疫不但增强了细胞免疫应答反应,而且引发了良好的体液免疫记忆,为深入研究肝片吸虫病基因工程疫苗开辟了新的途径。

以上为本篇毕业论文范文肝片吸虫重组GST、CatL蛋白及其DNA核酸联合免疫初步研究的介绍部分。

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