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猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究

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毕业论文范文题目：猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究，论文范文关键词：猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究
猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：卵母细胞的玻璃化冷冻技术简单、经济、实用、可靠,有利于降低饲养、繁育成本,扩大动物种群。同时也为其他生物技术如性别鉴定、体外受精、核移植和转基因等提供有用的实验素材。猪GV期卵母细胞脂质含量较为丰富,对低温极其敏感。本论文以猪的卵母细胞为对象,通过研究冷冻平衡时间、冷冻载体和冷冻基础液等,改进玻璃化冷冻方法,以提高猪卵母玻璃化冷冻的效果。实验一:为了检测不同平衡时间对猪GV期卵母细胞冷冻保存效果的影响,将猪GV期卵母细胞在以TCM-199为基础液的含10%乙二醇(ethyleneglycol,EG)中分别平衡3min和4min;在20%EG中分别平衡平衡2min和3min,在30%EG玻璃化冷冻液中平衡30s后装入半麦管,投入液氮中冷冻保存,解冻时用0.5M、0.25M和0M的蔗糖液分别处理5min,对照组卵母细胞不经冷冻直接体外成熟培养。结果发现,平衡5min和7min分别得到56.81±0.63%、47.61±4.02%的存活率,10.50±1.43%和5.02±1.64%成熟率,差异均（本文此处忽略..）显著(P0.05);两者均与对照组存活率93.99±0.27%和成熟率69.95±1.72%差异极显著(P0.01)。说明在不同的平衡时间下玻璃化冷冻都会对猪GV期卵母细胞造成损伤,平衡5min的冷冻效果优于平衡7min。实验二:为了检验不同冷冻基础液对猪GV期卵母细胞冷冻保存效果的影响,分别用TCM-199和杜氏磷酸缓冲溶液(Dulbecco'sPhosphateBufferedSaline,DPBS)为基础液,在不同基础液中分别添加10%EG、20%EG、30%EG的渗透性冷冻保护剂,卵母细胞均平衡3min、2min、30s后装入半麦管,投入液氮中冷冻保存,解冻时用0.5M、0.25M和0M的蔗糖液处理5min,对照组卵母细胞直接进行体外成熟培养。结果发现,TCM199和DPBS的存活率分别为52.90±1.98%和55.27±1.24%,成熟率分别9.96±1.15%、10.52±0.75%(P0.05),两试验组差异不显著。二者和对照组成活率99.43±0.99%和成熟率68.18±2.59%差异极显著(P0.01)。说明不同基础液冷冻保存猪GV期卵母细胞时都会对其造成损害,DPBS和T（本文此处忽略..）CM-199可以作为基础液冷冻保存猪GV期卵母细胞,且冷冻保存效果相似。实验三:为了检验不同解冻方法对猪GV期卵母细胞冷冻保存效果的影响。以TCM199为基础液添加10%、20%和30%的EG分别处理3min、2min和30s后,分别采用三步法(即先后在含0.5mol/L、0.25mol/L、0mol/L蔗糖溶液中分别处理5min,三步脱除冷冻保护剂),二步法(即先后在含0.5mol/L,0.25mol/L蔗糖溶液中分别处理5min,二步脱除冷冻保护剂),一步法(即在含0.5mol/L的蔗糖溶液中处理5min,一步脱除冷冻保护剂)脱除冷冻保护剂进行解冻。结果发现,三步法、二步法的存活率分别为53.49±3.57%、51.68±1.67%、和一步法39.68%±4.23%差异显著(P0.05),三步法的成熟率10.03±0.67%、和二步法及一步法6.7±0.13%、2.15±1.84%差异显著(P0.05)。说明三步法的解冻效果要优于二步法和一步法。实验四:为了探讨利用一种作者自制的新型玻璃化冷冻载体Cryosheet冷冻保存猪卵母细胞的可行性,以Cryoshee（此处忽略..）t法、玻璃微管法(Glassmicropipette,GMP)法和开放式拉长麦管法(Openpulledstraw,OPS)对猪GV期卵母细胞进行玻璃化冷冻保存。猪GV期卵母细胞在以TCM199为基础液含10%、20%和30%的EG中分别处理3min、2min和30s,解冻时用0.5M、0.25M和0M的蔗糖液分别处理5min。结果发现,存活率分别为56.92±2.19%、51.77±0.96%、52.48±1.33%,成熟率分别为11.13±1.13%、8.02±0.78%、6.4±1.27%,Cryosheet法、GMP法及OPS法之间差异均不显著(P0.05)。结果表明这种新型Cryosheet和进口载体相比不仅安全、可靠、成本低、制作简单,还可以用来有效地冷冻保存猪GV期卵母细胞。综上所述,玻璃化冷冻保存猪GV期卵母细胞时,以DPBS为基础液能取得与TCM199基础液相似的效果,在10%、20%EG平衡液中分别处理3min、2min后,再移入30%EG中处理30s,采用三步法解冻,可以获得理想的存活率和成熟率。同时,Cryosheet是一种较好的新（本文此处忽略..）型玻璃化冷冻载体,可以用来冷冻保存猪GV期卵母细胞。

以上为本篇毕业论文范文猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究的介绍部分。

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