弓形虫ME49株速殖子cDNA表达文库的构建与免疫学筛选

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弓形虫ME49株速殖子cDNA表达文库的构建与免疫学筛选

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毕业论文范文题目：弓形虫ME49株速殖子cDNA表达文库的构建与免疫学筛选，论文范文关键词：弓形虫ME49株速殖子cDNA表达文库的构建与免疫学筛选
弓形虫ME49株速殖子cDNA表达文库的构建与免疫学筛选毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：刚地弓形虫（Toxoplasmagondii）是专性细胞内寄生虫，属原生动物门，孢子虫纲。它能够感染多种家禽及野生生物，包括鸟类及人类；由其引起的弓形虫病（Toxoplasmosis）是一种呈全球性分布的重要的人兽共患病。人群普遍容易感染弓形虫。人可以通过摄食生的或未被煮熟的含有包囊的肉而感染，或接触被猫或其他被感染的猫科动物排泄物中包囊污染的土壤、食物或水而感染。大多数免疫功能正常的人感染弓形虫后呈隐性感染，无明显症状。女性在怀孕（略..）前感染弓形虫通常不会将感染传给胎儿；然而如果孕期(妊娠3-5周)感染弓形虫，弓形虫就会通过胎盘屏障传播给胎儿，引起流产、早产、死胎及先天性弓形虫病。先天性弓形虫病在胎儿和婴儿中可引起脑积水、脉络膜视网膜炎、肝脾肿大、血小板减少症、小头畸形等，严重者引起死亡。弓形虫病的诊断方法有直接镜检、病原学检查、动物接种、卵囊分离、免疫学检测、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验等。本实验通过利用弓形虫速殖子提取的总RNA进行弓形虫表达文库的构建，并用慢性感染（本文此处忽略..）弓形虫的大鼠血清对构建好的弓形虫文库进行免疫学筛选，以便获得高反应原性的抗原基因，为下一步制备高反应性的重组蛋白用于弓形虫病的诊断奠定基础。方法：本实验通过培育幼鼠肾细胞（BHK）来进行弓形虫ME49株速殖子的体外培养与传代，纯化出弓形虫速殖子，利用TrizolReagent提取出弓形虫总RNA，以总RNA为模板，在反转录酶的作用下分别反转录出cDNA的第一链及第二链，以及一系列的蛋白酶K处理，sfi酶切，用CHROMASPINH-1000进行（本文此处忽略..）过柱分离，与λTriple×2载体相连，最终经过体外包装形成cDNA初始文库；对初始文库进行滴度检测，文库扩增，最后进行筛库.用弓形虫感染大鼠6周后取其血清筛选表达性文库。将筛选出的阳性斑挑出，置于1mlSMbuffer中。继续进行二次筛选，将筛选出的阳性斑置于1mlSMbuffer中。将两次筛选出的阳性斑进行PCR扩增，然后将片段与PMD-18T连接后测序。结果：原始cDNA文库容量为4×10~7pfu，扩增后的滴度为4.2×10~9pfu/ml，文库的重组率（本文此处忽略..）大于95%，初筛后共筛出阳性克隆40个，复筛后持续阳性的克隆共有26个，通过测序结果表明共筛到2个cDNA分子，分别编码弓形虫ME49株ROP8蛋白和CELF蛋白。结论：成功构建弓形虫ME49株cDNA表达文库，采用人工感染的大鼠血清对文库进行筛选，通过测序分析获得2个cDNA分子，分别编码弓形虫ME49株ROP8蛋白和CELF蛋白，这两种蛋白有望成为弓形虫感染的新的诊断抗原。

以上为本篇毕业论文范文弓形虫ME49株速殖子cDNA表达文库的构建与免疫学筛选的介绍部分。

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