氯霉素兔单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的树破

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氯霉素兔单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的树破

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毕业论文范文题目：氯霉素兔单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的树破，论文范文关键词：氯霉素兔单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的树破
氯霉素兔单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的树破毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：氯霉素(Chloramphenicol,CAP)是一种广谱抗生素,对革兰氏阳性菌、阴性菌均有良好的克制造用。因此广泛利用于畜牧、水产养殖业。但在动物性食品内残留的CAP对人体的健康存在潜在的迫害。为此,世界上很多国度均制订了氯霉素的最高残留标准,严格限度其利用。为了适应参加WTO后的国际竞争与挑衅,必须树破起一种存在自主常识产权的疾速检测方法。酶联免疫吸附检测法(ELISA)作为一种疾速、高效的免疫检测技巧正逐步利用于CAP的检测。本研究用重氮化法合成了氯霉素的人工抗原,通过免疫兔子获得脾脏,继而利用杂交瘤技巧、重组抗体技巧获得高亲跟性、高特异性的抗氯霉素的单克隆抗体,优化了间接竞争ELISA法的检测前提,初步树破了牛奶、蜂蜜等样品中氯霉素残留的（本文此处忽略..）ELISA检测技巧。重要研究成果如下：1氯霉素人工抗原的合成及鉴定用重氮化法合成了氯霉素免疫抗原(CAP-BSA)以及包被抗原(CAP-OVA).用紫外扫描、SDS-PAGE电泳、飞翔时光质谱对免疫抗原进行鉴定,证明人工抗原合成成功。用飞翔时光质谱测定免疫抗原中BSA与CAP的偶联率为1：22。利用BCA蛋白试剂盒测得免疫抗原蛋白浓度为3.8mg/mL,包被抗原蛋白浓度为2.0mg/mL。2免疫及兔抗血清筛选用CAP-BSA免疫4只新西兰大白兔,编号76,77,78,79。以HRP为二抗,TMB为显色体系,对四只兔子的抗血清进行ELISA检测。其中76号兔子抗血清效价达128000,IC50达0.16μg/mL,抉择76号兔子脾脏进入下一步融合。3兔单克隆抗体的制备及纯化采取间接ELISA法、间接竞争ELISA法（略..）筛选出分泌抗体亲跟力强,细胞成长状况良好的杂交瘤细胞9-3。小转后获得了6株CAP单抗质粒。通过间接竞争ELISA实验、ELISA夹心法断定CAP9-3H1/L2质粒进入大转出产。采取ProteinA纯化方法纯化并收集CAP单克隆抗体,共得10mLCAP单克隆抗体,IgG浓度为1.23mg/mL。4ELISA检测前提优化通过间接ELISA实验以及间接竞争ELISA实验,对CAP单抗ELISA检测前提进行了优化,终极断定CAP单抗ELISA检测前提如下：包被原10000倍稀释,50uL每孔,4℃包被12h；含0.05%Tween-20的TBST洗涤四次；3%脱脂乳封闭1h；用pH8.0,离子浓度为0.1mol/L的TBS缓冲液稀释小分子竞争物跟一抗。一抗稀释16000倍,与系列浓度的小分子竞争物各50uL,37℃孵育1h；12000倍二抗,（文章此处忽略..）50uL/每孔,37℃反应45min；显色底物配方：A液B液等体积混淆。50uL/每孔,显色15min；2mol/L硫酸,50uL/每孔终止,OD450读数。5抗体免疫学性质研究该兔单克隆抗体对氯霉素有很强的亲跟性。当氯霉素浓度达到0.1ng/mL即可产生10%克制率。而当浓度在1.06ng/mL时可产生50%的克制率。氯霉素间接竞争ELISA标准曲线方程：标准曲线y=38.447x+49.082,R2=0.9924,线性良好。检测范畴在0.18-6.37ng/mL之间,最低检测限是0.1ng/mL。同时该抗体对氯霉素存在较高的特异性,除了跟琥珀氯霉素酸钠,甲砜霉素,氟甲砜霉素穿插反应率分辨为2.09%,18.10%,12.45%外,跟其余的喹诺酮类以及磺胺类药物均无穿插反应。6样品回收率检测该氯霉素单克隆抗体在猪尿样品检测中,回收率在73.31%-109.62%之间,变异系数介于6.98%-17.94%之间（本文此处忽略..）。在新鲜牛奶样品检测中,回收率在71.03%-95.01%之间,变异系数介于8.16%-16.93%之间。在蜂蜜检测中,回收率在71.10%-87.96%之间,变异系数介7.52%-14.74%之间。上述实验表明,本实验树破的间接竞争ELISA法可满意检测须要,有潜在的利用前景。

以上为本篇毕业论文范文氯霉素兔单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的树破的介绍部分。

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