内源性血管生成抑制剂—Kringle5蛋白在毕赤酵母菌中分泌表达及其

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内源性血管生成抑制剂—Kringle5蛋白在毕赤酵母菌中分泌表达及其

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内源性血管生成抑制剂—Kringle5蛋白在毕赤酵母菌中分泌表达及其毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的：Kringle5(简称K5)蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达、纯化及其质量评价方法研究，以及K5蛋白哺乳动物细胞分泌表达质粒的构建。方法：首先，用电转化的方法将p819-8αK5质粒转入毕赤酵母菌GS115感受态，通过不同浓度(2mg／ml、4mg／ml和8mg／ml)的G418—YPD平板结合表达量的筛选方法筛选出高效分（本文此处忽略..）泌表达K5蛋白的毕赤酵母菌。建立由DEAE离子交换层析和S—100分子筛层析为主体的纯化工艺流程。对纯化的蛋白进行质量评价试验，包括蛋白质的一般性质测定，如分子量、纯度、等电点、含量等以及生物学活性方面的测定，细胞水平：内皮细胞增殖抑制试验、内皮细胞迁移抑制试验；组织水平：鸡胚绒毛尿囊膜血管（本文此处忽略..）生成抑制试验；整体水平：移植瘤生长抑制试验。其次，通过两步PCR方法按照人的密码子偏爱性合成K5蛋白的DNA序列，克隆至哺乳动物细胞表达载体pDV，并对其生物学活性进行初步研究。结果：得到了一批具有高效分泌表达K5蛋白能力的毕赤酵母菌株，在诱导茵液上清中，K5蛋白含量在200mg／L以上。初步建（本文此处忽略..）立了纯化工艺流程，经纯化后的蛋白纯度在95％以上。测定了K5蛋白的一些理化指标，表观分子量在15％SDS—PAGE胶中表现为17.5KD左右；在等电聚焦电泳中其等电点表现为pH5.2左右。探讨了K5蛋白生物学活性测定方法，细胞水平：在内皮细胞增殖抑制试验中，K5蛋白表现出对内皮细胞增殖有抑制作用；在内皮细胞（略..）迁移抑制试验中，表现出对内皮细胞迁移的抑制作用；组织水平：在鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制试验中，表现出对鸡胚绒毛尿囊膜上的微小血管的生成和发育干扰作用；整体水平：在H22鼠源移植瘤生长抑制试

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