双启动子表达载体的构建以及酯酶B1基因的表达

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双启动子表达载体的构建以及酯酶B1基因的表达

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双启动子表达载体的构建以及酯酶B1基因的表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：农药是人们投放于环境中数量大?毒性广的一类化学物质?在过去几十年中,有机氯?有机磷等农药的开发与应用曾为人类在农?林业防治病虫害,提高农作物产量中起到了不可磨灭的作用?但那些性质比较稳定?难以分解消失的有毒农药的长期?大量使用,已造成严重的全球性环境污染和生态破坏?因此解决环境的农药残留问题已成为世界各国的研究热点?本文旨在将已证明对有机磷?有机氯以及溴氰菊酯等类农（此处忽略..）药有良好降解作用的抗性库蚊的解毒酶B1基因高效表达,为其实际应用创造条件?影响外源基因表达的因素很多,主要可以归结为两个方面:1)转录水平因素如启动子?终止子等;2)翻译水平因素如SD序列?密码子偏好性等?本文主要从转录水平进行研究,即构建双启动子表达载体?将CaMV35s启动子插入表达载体pRL439中,构建新的表达载体pRLdp,使其含有PpsbA和CaMV35s两个启动子?再将从抗性（此处忽略..）库蚊(Culexpipiens)中分离的解毒酶基因即酯酶B1基因与双启动子表达载体在T4DNA连接酶作用下进行体外连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,在含100μg/mL氨苄青霉素的LB平板上筛选转化子,提取质粒,分别进行XbaI和BamHI单酶切,电泳分析得到酯酶B1基因插入方向正确的表达质粒pRLdp-B1?挑取鉴定正确的阳性单菌落,接种于25ml含50μg/mL氨苄青霉素的液体LB培养基（略..）中,37℃,200rpm培养过夜,通过不同转接量(0.5%?1.0%?1.5%?2.0%?2.5%?3.0%)对酯酶活性影响的测定,确定2%为最佳转接量?按照2%的接种量转接培养,在同样条件下培养15小时,离心1WP=7双启动子表达载体的构建及酯酶B1基因的表达收集菌体?菌体在加入样品提取液后反复超声?冻融破壁,4℃,10000rpm离心15min,取上清液进行SDS-PAGE聚丙稀酰胺凝胶电泳进行鉴定,得到所需蛋白,与对照相比,表达量有所提高?以（此处忽略..）α-乙酸萘酯为底物对所构建工程菌进行酯酶活性测定,结果表明该工程菌能高效降解α-乙酸萘酯,具有较强的酯酶活性,通过与对照pRL439-B1工程菌的比较可以得出,pRLdp-B1反应初速度较快,且延续时间较长,具有较强的降解能力?

以上为本篇毕业论文范文双启动子表达载体的构建以及酯酶B1基因的表达的介绍部分。

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