除虫菊花均一化cDNA文库的构建及EST序列分析

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除虫菊花均一化cDNA文库的构建及EST序列分析

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毕业论文范文题目：除虫菊花均一化cDNA文库的构建及EST序列分析，论文范文关键词：除虫菊花均一化cDNA文库的构建及EST序列分析
除虫菊花均一化cDNA文库的构建及EST序列分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：除虫菊(ChrysanthemumCinerariifolium)是菊科多年生草本植物,是目前世界上唯一集约化种植的杀虫植物。除虫菊的杀虫活性物除虫菊素(pyrethrins)具有高效、低毒、广谱、低残留等优良杀虫特性,对人、温血动物和环境没有危害,已成为当今无公害生物杀虫剂的重要研究热点之一。除虫菊素主要在除虫菊花中合成,其含量占整个植株的95%以上,而干花中除虫菊素含量在1.2-2.0%。目前,天然除虫菊素已广泛应用在农业、林业、生物农药和食品卫生安全等多个（略..）领域。但国内外对于天然除虫菊素合成相关基因的研究很少,从而制约了利用基因工程技术提高除虫菊花中除虫菊素的含量。构建除虫菊花cDNA文库,可以为今后除虫菊素合成相关基因的研究奠定基础。本研究以除虫菊花为实验材料,经均一化处理,构建了除虫菊花的均一化cDNA文库,随机挑选部分克隆进行EST测序后,进行同源性比较和基因功能分析,得到以下结论:1采用试剂盒柱离心法提取除虫菊花的总RNA,经过1.2%琼脂糖凝胶电泳检测,提取的除虫菊花总RNA有清晰的两条带（略..）28S与18S,而且两条带清晰锐利,没有拖尾,说明提取总RNA完整,没有降解。以总RNA为模板,利用SMARTⅣOligonuleotide和CDS-3Madapter为引物,在PowerScriptReverseTranscriptase作用下合成第一链cDNA并且进一步合成双链cDNA,用均一化酶DSN、限制性内切酶sfiI处理后,凝胶回收400bp以上的片段,浓缩后与载体pDNR-LIB载体连接,电转化转入大肠杆菌,获得除虫菊花cDNA原始文库。原（略..）始文库经扩增后,所得扩增文库置于-80℃超低温冰箱中保存。2将得到的原始文库按比例稀释后铺平板并于37℃下过夜培养,计算单菌落数。得出原始文库滴度为2.8×10~5pfu/mL,重组率为96%。利用载体的M13引物进行PCR扩增,得到该文库的大部分插入片段大小在0.4-1.3kb。采用相同的方法测定cDNA扩增文库的滴度约为2.0×10~9pfu/mL。3从文库中随机挑取部分克隆,经PCR检测都有外源插入片段。对65个阳性克隆采用T7作为测序引物,从cDNA5'端进行测序,得到61个EST序列,经过（此处忽略..）比较拼接后有3条序列分别是由2个EST拼接而成,最终得到有效序列58个。4通过BLASTX与NCBI的GeneBank数据库中现有的ESTs进行同源性分析表明,所得的58个ESTs序列中有48(82.3%)个具有同源序列,其中40个序列有明确的功能注释,8个为未知功能基因,有10个(17.2%)ESTs序列未找到同源序列。

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