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农杆菌介导获得的转基因棉花基因组中外源基因构造与整合方法

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毕业论文范文题目:农杆菌介导获得的转基因棉花基因组中外源基因构造与整合方法,论文范文关键词:农杆菌介导获得的转基因棉花基因组中外源基因构造与整合方法
农杆菌介导获得的转基因棉花基因组中外源基因构造与整合方法毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:棉花是重要的经济作物,利用基因工程改进棉花品种、进步棉花的种植效益已经获得宏大成功。农杆菌介导的遗传转化方法是目前研究最多、利用最广的动物转基因方法,该方法因存在操作简便、转化效力高、较少的插入拷贝数以及遗传牢固等长处,而被动物转基因工作者广泛推许。当初已经树破了很多动物比较成熟的遗传转化体系,并且利用这些体系获得了贸易化的玉米、大豆、棉花等转基因农作物。目前的研究已经明白证明,农杆菌可能将位于Ti质粒上的两个25bps的正向反复的边界(左边界LeftBorder与右边界RightBord(此处忽略..)er)之间的一段DNA(转移DNA简称T-DNA)从质粒上切割下来并在质粒毒性区编码的各种毒性蛋白的作用之下穿过细菌跟动物细胞进入到动物细胞核中,并在农杆菌编码的某些蛋白跟动物细胞中的某些因子的独特作用之下整合到动物的基因组中,但T-DNA边界序列之外的载体序列偶尔也会整合到动物染色体上。T-DNA的整合无位点特异性,不需长片段的同源性,因此遵守“异样整合”的机制。固然寰球已经有大面积的转基因棉花在种植,但有对于棉花遗传转化中T-DNA构造以及整合机制的研究尚未见报道。越来越多的研究发明在(略..)很多的转基因动物中存在着相称比例的凑近左边界的载体骨架序列的整合,咱们的研究利用双元载体pPZP111构建的绿色荧光蛋白基因的简单质粒载体pPZP-GFP农杆菌介导转化海洋棉(GossypiumhirsutumL.)获得的T0株系,发明存在相称数量的左边界以外的载体序列的整合跟相称程度的串联反复的多拷贝的单位点整合以及一些重排或缺失的T-DNA构造单元。根据反向PCR获得的T0代植株T-DNA整合位点的侧翼序列,设计了扩增棉花基因组中T-DNA插入位点的引物来扩增T-DNA插入前野生型海洋棉Cok(本文此处忽略..)er312序列,分析T-DNA的插入位点在T-DNA整合前后的序列变更。得到了八种T-DNA整合位点序列的变更。分析看出T-DNA的边界序列与插入位点存在着微同源性,存在比较广泛的插入位点序列的缺失,在左边界跟基因组序列连接处存在着填充DNA,它与紧邻左边界的载体骨架序列并不同源性,可能来主动物的基因组序列,并且存在着正向跟反向的反复甚至有回文构造。抉择T0植株GFP47植株来研究T-DNA插入位点的构造以及遗传牢固性,PCR跟Southern杂交分析证明其不仅整合了多个拷贝的畸形的T-DNA,(此处忽略..)而且有紧邻T-DNA左边界的载体骨架序列的整合。对来源于GFP47的33个T1个体的PCR分析表明,T1代中可能分别出只有畸形T-DNA整合的个体。对T1群体中不同基因型个体的Southern杂交分析成果显示,该多拷贝整合的T0转化体至少在棉花基因组中有四个插入位点且位于不同的染色体上,不同的Southern带型暗示不同插入位点的T-DNA构造跟排布有很大的不同。至少有一个位点整合了只包含目标基因跟抉择标记基因在内的畸形T-DNA构造。


以上为本篇毕业论文范文农杆菌介导获得的转基因棉花基因组中外源基因构造与整合方法的介绍部分。
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