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紫花苜蓿盐诱导基因的筛选与克隆

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毕业论文范文题目：紫花苜蓿盐诱导基因的筛选与克隆，论文范文关键词：紫花苜蓿盐诱导基因的筛选与克隆
紫花苜蓿盐诱导基因的筛选与克隆毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：土壤盐渍化是影响农作物产量和质量的主要因素之一。植物抗盐是一个由多基因控制的数量性状,这决定了抗盐机制的复杂性。虽然在植物耐盐方面研究进展迅速,但其具体分子生物学机制仍然不甚明了。本研究旨在通过分离和克隆与紫花苜蓿(Medicagosativa)盐诱导表达相关基因,为揭示紫花苜蓿抗盐分子机制、紫花苜蓿的耐盐育种提供基础。本研究取得的主要结果如下:1、应用SMRATcDNAPCR技术扩增了紫花苜蓿盐胁迫和对照cDNA,产物大部分弥散在0.7-2.0kb之间,并且有明显的特征带,这与大部分物种mRNA的真实大小与特征相符。扩增后的cDNA进行抑制性消减杂交,成功构建了包含有810个（略..）克隆的紫花苜蓿盐胁迫下生长与正常生长的差异表达cDNA文库。随机挑选12个克隆进行PCR,结果表明插入片段主要分布在250~750bp之间,符合预期大小。2、应用反向Northern斑点杂交技术从消减cDNA文库中高通量筛选得到119个阳性差异表达克隆,测序后得到110条有效的EST序列,总共82个单独EST序列其中包含有16个contigs和66个singlets。将82个EST序列递交至GeneBank,获得相对应的接受号从FE896855到FE896936。3、EST序列的BLASTn结果显示在82个EST中45个的同源基因为已知功能,37个为未知功能,其中有4个未找到同源序列。统计显示肌醇-1-磷酸合成酶,核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶,脂质（本文此处忽略..）转运蛋白,水通道蛋白,肌醇半乳糖苷合成酶,冷诱导特异蛋白,脱水蛋白频率最高;BLASTp结果显示,所获得的EST可以分为物质和能量代谢、转录、蛋白命运、结合蛋白、信号转导、机体防御与自救、发育、转运、未分类、未知功能9类。4、利用从文库中筛选到的一个与大豆基因pGmPM10(accessionNo.AAA91965.1)同源的EST序列,进行3′-RACE和5′-RACE,获得一个cDNA全长序列为1728bp的基因,初步命名为MsLEA3-1(genebankaccessionNo.EU665182)。其最大开放阅读框编码一个含有436个氨基酸的蛋白,等电点为5.18,分子量为47.0KD。对MsLEA3-1蛋白氨基酸序列进行同源比（本文此处忽略..）对分析表明,与大豆LEA蛋白pGmPM10同源性最高,E值为1e-108。5、蛋白质氨基酸序列分析表明:○1氨基酸组成及含量与其他LEA蛋白非常接近,小分子量氨基酸和亲水性氨基酸含量非常高,致使蛋白质高度亲水,半胱氨酸和色氨酸含量很低;○2氨基酸序列中存在31个11-mer重复序列,其一致序列为TKDYAGDAAEK,表明MsLEA3-1为第3组LEA蛋白;○3MsLEA3-1蛋白与大豆的pGmPM10和pGmPM8蛋白11-mer重复序列组成与分布非常接近,而与第3组LEA蛋白的TypeI和TypeII11-mer重复的氨基酸分布有所不同,推测MsLEA3-1蛋白pGmPM10和pGmPM8一样属于新的第三组LEA蛋白（文章此处忽略..）类型;○4在MsLEA3-1蛋白的N端有明显的信号肽特征,C端有一ER滞留信号类似结构,推测这一LEA蛋白可能在内质网内行使功能;○5二级结构预测显示,MsLEA3-1蛋白的二级结构主要由α-螺旋组成,11-mer重复能形成兼性α-螺旋,推测其结构在细胞脱水状态下为LEA蛋白发挥其作用具有重要意义。

以上为本篇毕业论文范文紫花苜蓿盐诱导基因的筛选与克隆的介绍部分。

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