苹果[Malus domestica]DHAR基因cDNA全长克隆及其植物表达载体构

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苹果[Malus domestica]DHAR基因cDNA全长克隆及其植物表达载体构

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苹果[Malus domestica]DHAR基因cDNA全长克隆及其植物表达载体构毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：抗坏血酸作为一种重要的抗氧化剂,在植物细胞的酶促和非酶促反应中都具有重要意义。为了维持抗坏血酸的抗氧化活力,它的再生就显得尤为重要。在抵抗氧化胁迫的反应中,抗坏血酸自身被氧化为单脱氢抗坏血酸,一部分单脱氢抗坏血酸在单脱氢抗坏血酸还原酶的催化作用下还原为抗坏血酸,另一部分单脱氢抗坏血酸的在歧化作用下被不成比例地还（文章此处忽略..）原为抗坏血酸或氧化为脱氢抗坏血酸。脱氢抗坏血酸还原酶以谷胱甘肽为底物,催化脱氢抗坏血酸还原为抗坏血酸,在循环利用抗坏血酸、保护细胞组分抵御氧化损伤中发挥重要的作用。目前尚未见到从果树中克隆到脱氢抗坏血酸还原酶基因全长的报道。本试验以嘎拉苹果叶片为试材,克隆了脱氢抗坏血酸还原酶基因cDNA全长并构建其植物表达载体（文章此处忽略..）,为进一步转化其他植物、更好的研究其代谢途径以及在抗坏血酸-谷胱甘肽循环中的作用奠定了基础。主要研究结果如下:1.比较了三种方法提取“皇家嘎拉”苹果叶片总RNA的效果,发现改进的十二烷基硫酸钠-热酚法可提出高质量的RNA,且成本低廉,最终选定此法用于实验。2.根据GeneBank中已经登陆的几个编码苹果脱氢抗坏血酸（文章此处忽略..）还原酶基因cDNA片段的保守序列设计两对引物,运用巢式PCR扩增到一个中间片段,再根据此中间片段分别设计特异引物进行3’-cDNA末端快速扩增技术和5’-cDNA末端快速扩增技术分别扩增到苹果脱氢抗坏血酸还原酶基因cDNA的3’端和5’端序列,最后获得基因cDNA全长。序列包括的最大开放阅读框编码314个氨基酸;序列同源性分（略..）析表明苹果脱氢抗坏血酸还原酶基因与烟草脱氢抗坏血酸还原酶基因、水稻脱氢抗坏血酸还原酶基因和番茄脱氢抗坏血酸还原酶基因1/2的同源性分别为76℅、72℅、76℅/69℅。3.将苹果脱氢抗坏血酸还原酶基因插入到表达载体pSB166的多克隆位点中,构建了含有它的植物表达载体pSB-DHAR。

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