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转NtAOX1a基因烟草的获得及其抗逆性分析

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毕业论文范文题目：转NtAOX1a基因烟草的获得及其抗逆性分析，论文范文关键词：转NtAOX1a基因烟草的获得及其抗逆性分析
转NtAOX1a基因烟草的获得及其抗逆性分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：高等植物线粒体电子传递链主要有两条,一条是对氰化物敏感的细胞色素途径,另一条是抗氰化物的交替氧化途径,后者由位于线粒体内膜上的交替氧化酶(alternativeoxidase,AOX)所催化。AOX由一个小的核基因家族所编码。AOX基因和AOX蛋白的表达受到多种生物和非生物胁迫的诱导。研究表明,AOX在维持各种条件下植物体内的动态平衡以及保护植物免受活性氧(ROS)的伤害中起到非常重要的作用。AOX能对低温做出响应,而且参与植物的抗病毒过程。但是,AOX是否会影响低（此处忽略..）温和病毒侵染时的ROS积累,以及AOX是否还有别的生物学功能仍然知之甚少。本研究从三生烟草中克隆了交替氧化酶基因(NtAOX1a),构建含NtAOX1a基因的2种植物表达载体,通过农杆菌介导转化三生烟草,获得了含不同NtAOX1a表达水平的转基因植株,并对这些转基因株系的T3代植株进行了生物学功能分析。具体结果如下:1、根据已报道的AOX1基因核苷酸序列,设计特异引物,采用RT-PCR的方法,从三生烟草中克隆了交替氧化酶基因(NtAOX1a),cDNA全长为1071bp。2、构建2种植物表达载（文章此处忽略..）体,即含正义NtAOX1a的载体pBI-S-NtAOX1a,含反义NtAOX1a的载体pBI-AS-NtAOX1a。通过农杆菌介导将2种载体分别转化三生烟草,同时转化pBI121空载体作为对照,从而获得3种不同基因型的转基因三生烟草植株。3、对不同基因型转基因烟草当代(T_0代)所结的种子,经卡那霉素筛选,并结合转基因株系的T_1代植株PCR鉴定结果,初步证明在被检验的转基因株系中,转基因在T_1代中的遗传基本符合3:1的分离规律。4、筛选符合3:1分离规律的T_1代植株,分别进行Northern杂（略..）交和Western杂交分析,表明在T_1代转基因烟草中,NtAOX1a已经成功表达。5、在T_1代转基因烟草中选出有代表性的株系繁殖至T_3代,Northern杂交和Western杂交分析验证NtAOX1a在T_3代株系中稳定表达;然后对T_3代植株进行呼吸测定,结果表明AOX途径呼吸速率随NtAOX1a表达水平的改变而改变。6、在分子鉴定的基础上,对T_3代转基因植株进行了生物学功能分析。低温胁迫下,转正义NtAOX1a的株系清除过氧化氢(H_2O_2)的能力较野生型显著提高,受到ROS（本文此处忽略..）的伤害也较小;接种烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)后,与野生型相比,转反义NtAOX1a的株系具有明显的抗病性,而且AOX在抗病中的功能似乎与其对H_2O_2的清除作用有关;种子萌发实验表明,当细胞色素途径被抑制后,AOX过量表达能够显著提高种子对H_2O_2的抗性,表明AOX在植物的早期发育阶段也起到一定作用。

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