BrCHS1启动子光反应顺式作用元件结合蛋白的筛选和分析

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BrCHS1启动子光反应顺式作用元件结合蛋白的筛选和分析

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毕业论文范文题目：BrCHS1启动子光反应顺式作用元件结合蛋白的筛选和分析，论文范文关键词：BrCHS1启动子光反应顺式作用元件结合蛋白的筛选和分析
BrCHS1启动子光反应顺式作用元件结合蛋白的筛选和分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：花青素是植物体内重要的次级代谢产物,不仅能够决定花、果实、蔬菜的颜色,吸引动物作为传粉者和种子传播者,还能保护植物免受各种生物和非生物胁迫损伤。查尔酮合成酶(chalconesynthase,CHS)是指导花青素合成的关键酶之一,津田芜菁(BrassicarapaL.subsp.rapaTsuda)花青素合成以及津田芜菁CHS1(BrCHSl)基因的表达受UV-A特异诱导。本研究通过生物信息学分析找出BrCH（此处忽略..）S1启动子区的光反应元件,通过酵母单杂交验证BrCHSl启动子G-box与BrPAP1、BrPAP2、BrTT8、BrBZIP、BrHY5的相互作用情况,并通过酵母单杂交分离BrCHS1启动子顺式作用元件UNIT1的结合蛋白。旨在寻找与BrCHS1启动子光反应元件相结合的转录因子,为研究UV-A特异诱导BrCHS1表达和花青素合成的分子机理提供参考和依据。本研究取得的主要结果如下：1.用PlantCARE对BrCH（此处忽略..）S1启动子区从3’开始的1500bp序列进行顺式作用元件分析,结果表明该序列除了具有一般真核生物启动子结构所普遍具有的保守序列如CAATbox和TATAbox外,还找到了很多与光诱导相关的元件,如：AE-box、Box-Ⅰ、CATT-motif,G-Box、GT1-motif,LAMP-element、TCT-motif和CHS-UNIT1。2.人工合成了三重G-box寡核苷酸序列,并以之为诱饵构建了诱饵酵母。将（本文此处忽略..）BrPAP1、BrPAP2、BrTT8、BrBZIP、BrHY5蛋白序列构建到pGADT7-Rec表达载体,并转化诱饵菌株进行结合验证。结果证明,BrTT8和BrBZIP与G-box元件具有较强的结合能力,而BrPAP1、BrPAP2、BrHY5不与G-box结合。3.人工合成了BrCHSl启动子中由ACE、RRE和MRE光反应元件组成的UNIT1元件的寡核苷酸序列,并将其作为诱饵,构建了诱饵酵母菌株。合成了津田芜菁（此处忽略..）cDNA,与pGADT7-Rec表达载体一起转化诱饵酵母,在酵母细胞内构建了酵母单杂交文库同时进行了筛选。结果表明,筛选酵母总数为2.73×106个,获得68个阳性克隆。酵母菌落PCR获得了阳性克隆中的cDNA插入片段,将其测序后进行生物信息学分析,结果表明筛选获得了具有不同保守结构域,参与各种信号转导和胁迫应答的蛋白。

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