甘蓝型油菜查尔酮异构酶基因的反义转化

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甘蓝型油菜查尔酮异构酶基因的反义转化

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毕业论文范文题目：甘蓝型油菜查尔酮异构酶基因的反义转化，论文范文关键词：甘蓝型油菜查尔酮异构酶基因的反义转化
甘蓝型油菜查尔酮异构酶基因的反义转化毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：油菜是世界四大油料作物之一,也是我国最重要的油料作物之一。甘蓝型黄籽油菜与黑(褐)籽油菜相比,种子的含油量普遍较高,而且具有种皮薄、色素少、纤维素和多酚类物质含量低、油质清澈透明、蛋白质含量高等一系列突出优点。培育遗传稳定、农艺性状优良的黄籽甘蓝型油菜已成为油菜育种的一个重要目标之一。应用转基因育种技术,能突破物种间的界限,转移有用的基因,使可利用的基因资源大大拓宽,同时加快目标性状的定向选育,提高育种效率。但从目前甘蓝型油菜转基因报道情况看,均存在转化效率不高的问题。目前在拟南芥中已鉴定出21个透明种皮(Transparenttesta,tt)基因位点和一个BAN位点,并且许多tt基因在拟南芥中已经被克隆。甘蓝型油菜黄籽性状形成的分子机理目前还不清楚,（文章此处忽略..）由于甘蓝型油菜和拟南芥同属于十字花科植物,亲缘关系较近,因此,可以借鉴拟南芥透明种皮(Transparenttesta,tt)性状研究成果进行甘蓝型油菜籽粒色性状的研究,以期阐明甘蓝型油菜种皮颜色形成的调控机制。查尔酮异构酶(chalconeisomerase,CHI,EC5.5.1.6)催化6'-羟基查尔酮转变成5,-羟基黄烷酮,是类黄酮合成途径中早期阶段的关键酶也是第一个被认识的类黄酮合成相关酶,在拟南芥中,CHI基因的突变(tt5)导致种皮由深褐色改变为黄色,形成tt5突变体。研究油菜CHI基因有助于进一步了解甘蓝型油菜黄籽性状形成的分子机制,为创造甘蓝型黄籽油菜新品种提供基础。本研究利用含有CHI基因反义表达载体的根癌农杆菌共培养法转化甘蓝型油菜“华双4号”下胚轴（本文此处忽略..）,通过组织化学法检测报告基因GUS的表达情况,研究了卡那霉素筛选浓度、农杆菌培养方式和预培养基激素配比对转化效果的影响,这些影响因素的研究,以往报道很少。首次获得了抑制CHI基因的转基因植株,经GUS组织化学染色检测、PCR检测和Southern检测,确定CHI反义外源基因整合到了转化植株基因组中。主要结论和创新点如下:1、筛选压卡那霉素浓度对转化效率的影响将农杆菌侵染共培养后的下胚轴接入不同kan浓度的筛选培养基中,培养10d后检测GUS表达情况。结果表明,筛选压浓度对转化效率有明显的影响,kan浓度在15mg/L时转化效率最高。2、根癌农杆菌培养方式对转化效率的影响离心收集活化的农杆菌,然后用不同的方式继续培养农杆菌后用于侵染下胚轴。GUS表达检测结（文章此处忽略..）果表明,用LB培养基活化后的农杆菌再用添加AS的MS培养液继续培养6～24h对转化有明显的促进作用;不同的农杆菌培养方式对转化效率有明显差异,在试验的6种农杆菌培养方式中S2-5的转化效果最好,即收集活化后的农杆菌用MS+AS+抗生素重悬24h,再用MS+AS培养6h。这种能提高转化效率的培养活化方式到目前为止,从来没有深入研究和报道过,但其对优化甘蓝型油菜遗传转化体系有重要意义。3、预培养基激素配比对转化效率的影响将外植体在含不同2,4-D与6BA浓度的预培养基中培养,然后进行农杆菌侵染。结果表明,2,4-D与6BA之间的相互作用对转化有重要影响;这种在预培养基中2,4-D与6BA相互作用对转化效率的影响也是首次系统研究和报道。同时,我们还发现,在试验的预培养基激素组合中,2,4-（文章此处忽略..）D2.00mg/L与6BA0.25mg/L,的组合转化效率是最高的。4、转化植株的检测鉴定转化再生植株经GUS染色、PCR扩增和Southern杂交鉴定,可确定外源CHI基因反义片段已整合到转基因植株基因组中,表明转基因是成功的,这是目前世界上首次利用农杆菌介导法将CHI基因反义片段导入甘蓝型油菜并成功得到转基因植株;形态学调查发现,转化植株种子的颜色略有变浅,其他形态特征方面均无显著变化。通过反义抑制查尔酮异构酶基因,影响了种皮色素的积累,表明甘蓝型油菜种皮的色素确实与类黄酮途径有关,受类黄酮途径控制,这对理解甘蓝型油菜种皮色素的机理有帮助。

以上为本篇毕业论文范文甘蓝型油菜查尔酮异构酶基因的反义转化的介绍部分。

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