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来源于Pectobacterium wasabiae和Pedobacter sp.的植酸酶基因克

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毕业论文范文题目:来源于Pectobacterium wasabiae和Pedobacter sp.的植酸酶基因克,论文范文关键词:来源于Pectobacterium wasabiae和Pedobacter sp.的植酸酶基因克
来源于Pectobacterium wasabiae和Pedobacter sp.的植酸酶基因克毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:植酸酶(肌醇六磷酸水解酶,EC.3.2.1.8)是一类能把植酸(肌醇六磷酸)降解为肌醇和无机磷的磷酸水解酶,近些年来作为一种新型的绿色饲料添加剂被广泛研究。在动物饲料中添加植酸酶不但可以提高饲料的营养价值,降低饲料成本,而且可以减少植酸对环境的污染,因此被广泛的应用于饲料和食品工业。本研究的目的是从一些特殊环境分离得到的菌株出发来克隆具有特殊性质的植酸酶基因。本研究利用两步PCR(即简并PCR和热不对称交错PCR(TAIL-PCR))和构建基因组文库的方法,分别从五株菌中克隆到了五个植酸酶基因,包括筛选于雪(文章此处忽略..)莲根部土样的菌株Pedobactersp.MJ11和Flavobacteriumsp.MY8,筛选于池塘底泥菌株Pseudomonassp.206B,细胞胞外具有强蛋白酶活性的弗氏链霉菌Streptomycesfradiaevar.k11(S221)和植物腐败菌PectobacteriumwasabiaeB189中,分别命名为phyMJ11、phyMY8、phy206B、phyS221和phyB189。经过序列分析和结构预测,确定phy206B和phyB189为组氨酸酸性植酸酶(HAP)基因,phyS221、phyMJ11和phyMY8为β-折叠桶植酸酶(BPP)基因。(本文此处忽略..)通过序列比对分析,克隆到的植酸酶基因所编码的氨基酸序列与已报道的植酸酶的序列一致性都在40–70%之间,可以初步确定这些基因都是新的植酸酶基因。除Pseudomonas属外,其他四个菌属都是第一次克隆到了植酸酶基因。来源于P.wasabiaeB189的植酸酶与来源于Pseudomonassyringae的组氨酸酸性植酸酶PhyM具有最高的一致性(48.5%)。将phyB189在大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)中进行了表达,并对重组植酸酶r-PhyB189进行纯化和性质测定。成熟蛋白的分子量为45kD,最适pH值是(本文此处忽略..)5.0,最适温度为50℃,比活为1,072U·mg~(–1),动力学分析结果表明其Km值为0.17mM,Vmax为1,714μmol·min~(–1)·mg~(–1)。来源于Pedobactersp.MJ11的植酸酶与来源于Desulfuromonasacetoxidans的假定β-折叠桶植酸酶蛋白序列具有最高的一致性(63.0%)。将phyMJ11在大肠杆菌中表达,并对重组植酸酶r-PhyMJ11进行了纯化以及性质的测定。其成熟蛋白的分子量为37.3kD,最适Ca~(2+)浓度为1mM;最适pH值是7.0,最适温度为45℃,比活为24.35U·mg~(–1),动力学分析结果表明其Km为1.(略..)28mM,Vmax为71.9μmol·min~(–1)·mg~(–1);在豆粕水解实验中,r-PhyMJ11在20℃中性条件下水解豆粕的能力比其他目前工业上使用的植酸酶更有优势,因此在水产养殖中更具有应用潜力。


以上为本篇毕业论文范文来源于Pectobacterium wasabiae和Pedobacter sp.的植酸酶基因克的介绍部分。
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