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嗜水气单胞菌aopB~-/aopD~-Ah2056株的构建

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毕业论文范文题目：嗜水气单胞菌aopB~-/aopD~-Ah2056株的构建，论文范文关键词：嗜水气单胞菌aopB~-/aopD~-Ah2056株的构建
嗜水气单胞菌aopB~-/aopD~-Ah2056株的构建毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)是一种人畜共患的病原菌,也是一种食源性病原菌。特别是嗜水气单胞菌引起的水生动物细菌性败血症,是我国水产养殖史上危害最大、造成的经济损失最严重的一种急性传染病。在现阶段预防和控制该病的主要措施是利用细菌灭活疫苗免疫接种和使用抗菌药。灭活疫苗能够降低死亡率,不能降低其发病率,也不能对异源血清型菌的感染提供较好的交叉保护,抗（本文此处忽略..）菌药又存在抗药性和药物残留问题。与灭活疫苗不同,弱毒疫苗能够重复提呈抗原和诱导机体产生持续性免疫应答和保护,因此,通过缺失毒力因子构建弱毒活疫苗已是国内外疫苗研究的热点之一。本研究以本地分离的Ah2056菌株为亲本,构建了AhaopB~-/aopD~-基因缺失株。主要工作如下:1.Ah2056亲本株的鉴定参照GenBank中嗜水气单胞菌16SrRNA基因序列,从本地分离的嗜水气单胞菌基因组（略..）中扩增16SrRNA片段,连接到克隆载体pMD18T上,筛选阳性克隆,测序,绘制系统进化树进行分类。2.重组自杀性质粒pREaopB~-/aopD~-的构建参照GenBank中嗜水气单胞菌aopB/aopD序列,从Ah2056基因组中扩增aopB/aopD上、下游片断,以pBluescriptⅡSK为中间转移载体连接到自杀性质粒pRE112上,构建了缺失369bp的aopB~-/aopD~-基因并（文章此处忽略..）含有蔗糖敏感基因(sacB)的重组自杀性质粒pREaopB~-/aopD~-。3.aopB~-/aopD~-基因缺失株的的构建首先以重组自杀性质粒pREaopB~-/aopD~-转化大肠杆菌X7213,再以大肠杆菌X7213阳性克隆为供体菌,与受体菌Ah2056进行接合转移,经涂布氯霉素(Cm)抗性平板并转印到含10%蔗糖的平皿,筛选出Cm抗性(Cm~R)蔗糖敏感(Suc~S)的接合子,并用PCR鉴定重组自杀性质粒（本文此处忽略..）己经整合到染色体中。阳性接合子在不含NaCl的培养基中培养促使第二次同源重组。再涂布含10%蔗糖的平皿,并转印到Cm平板上,筛选出Cm敏感(Cm~S)蔗糖抗性(Suc~R)的克隆,并用PCR鉴定,证实了第二次交换,从而构建了aopB~-/aopD~-基因缺失株。

以上为本篇毕业论文范文嗜水气单胞菌aopB~-/aopD~-Ah2056株的构建的介绍部分。

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