草鱼CRP基因cDNA克隆与分析及原核表达载体构建

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草鱼CRP基因cDNA克隆与分析及原核表达载体构建

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毕业论文范文题目：草鱼CRP基因cDNA克隆与分析及原核表达载体构建，论文范文关键词：草鱼CRP基因cDNA克隆与分析及原核表达载体构建
草鱼CRP基因cDNA克隆与分析及原核表达载体构建毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：CRP(C-reactiveprotein)是一种急性时相蛋白,CRP能与细菌、真菌以及寄生虫细胞膜上的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺结合。CRP还能与磷脂、脂蛋白、脂多糖、染色质、半乳糖和胆固醇等多种配体结合,在动物机体的天然免疫和炎症反应中发挥重要功能。本研究采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)’对草鱼C反应蛋白基因的cDNA全长序列进行克隆,序列分析,并通过RT-PCR方法研究了草鱼CRP组织分布,同时成功构建了草鱼CRP原核表达重组质粒。这些实验室研究,为进一步探讨C反应蛋白结构与功能的关系及其在草鱼免疫系统中的作用奠定理论基础。1克隆到草鱼C-反应蛋（本文此处忽略..）白基因cDNA全长序列本研究根据草鱼肝胰脏组织cDNA文库获得的EST序列(CK233056)设计特异性引物,采用SMARTTMRACE(rapidamplificationofcDNAends)方法从草鱼肝胰脏扩增出草鱼C反应蛋白基因全长cDNA。结果表明草鱼C反应蛋白基因(GenBank登录号：FJ547474)cDNA全长为889bp,其中开放阅读框为672bp,共编码224个氨基酸,5’非编码区长74bp，3’非编码区长143bp,在3’非编码区存在1个加尾巴信号AATAAA.由cDNA推断的C-反应蛋白的等电点为5.73,分子量为24938.6Da。SignalP预测CRP由15个氨基酸残基组成的信号肽,不存在跨膜区域。2对草鱼弹性（略..）蛋白酶氨基酸序列的同源性比较与系统进化分析为了揭示草鱼与哺乳动物和其他硬骨鱼类C反应蛋白之间的系统进化关系,本研究将不同物种来源的C反应蛋白氨基酸序列通过ClustalW同源序列比对,并通过邻位相接的方法构建了系统进化树,草鱼CRP推导的氨基酸序列相似性分析发现：草鱼CRP与鲤鱼和斑马鱼的相似性分别为91%和89%,与其他硬骨鱼类CRP的相似性为68.0%-50.0%,与爬行类、和哺乳类CRP的相似性为35.0%-27.0%,与人类CRP的相似性为33.0%。①不同物种的C-反应蛋白聚成一个簇；簇以下有三个大分支：其中一个分支由哺乳动物,人类,家畜动物,老鼠,等构成,另一分支由鱼类构成,表明鱼类与其（此处忽略..）他物种C反应蛋白的分化发生在一个较早的进化时期。鸭嘴兽C反应蛋白和草鱼的亲缘关系最远,单独成为一支。②草鱼C反应蛋白和鲤鱼的亲缘关系最近,聚为一支；其次就是斑马鱼和三刺鱼。与哺乳动物如人、家鼠、马、兔、牛和猪的亲缘关系较远。人类C反应蛋白和猕猴、兔在进化上极为接近,人和猕猴为一支。马和牛的亲缘关系较近,聚为一支。以上表明,虽然C反应蛋白是非常古老的,高度保守的分子,其氨基酸序列在进化上保守性较高,但也呈现物种间在进化上的差异。3草鱼C-反应蛋白在草鱼不同组织及病理条件下表达的研究CRP在实验的七个组织中均有表达,健康对照组各个组织表达量差异不显著。嗜（略..）水产气单胞菌人工感染24h后,CRP在所有的组织中的mRNA水平均明显升高,平均升高达4倍左右,在肝脏的表达量最高。而在感染48h后,心脏和鳃中的mRNA水平降低约三分之一。其它组织变化不明显。结果揭示了草鱼C反应蛋白在体内许多组织广泛存在,是一种急性期反应蛋白。在鱼类机体受外界侵袭发生炎症反应时,在短时间内,体内C反应蛋白合成大量增加,草鱼C反应蛋白在参与机体免疫方面具有重要作用。

以上为本篇毕业论文范文草鱼CRP基因cDNA克隆与分析及原核表达载体构建的介绍部分。

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