嗜水气单胞菌外膜蛋白基因工程活载体疫苗的制备及其对小鼠免疫效果的研究

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嗜水气单胞菌外膜蛋白基因工程活载体疫苗的制备及其对小鼠免疫效果的研究

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毕业论文范文题目：嗜水气单胞菌外膜蛋白基因工程活载体疫苗的制备及其对小鼠免疫效果的研究，论文范文关键词：嗜水气单胞菌外膜蛋白基因工程活载体疫苗的制备及其对小鼠免疫效果的研究
嗜水气单胞菌外膜蛋白基因工程活载体疫苗的制备及其对小鼠免疫效果的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：利用益生菌表达致病菌相关抗原而制成的活载体口服疫苗具有接种方便、安全性好、免疫原性强和对动物应激小等优点,是近年来疫苗研究的热点之一。嗜水气单胞菌是引起水产动物细菌性疾病的主要病原菌,其致病性与外膜蛋白、外毒素、蛋白酶等相关毒力因子密切相关。其中外膜蛋白作为一种主要的致病因子在细菌侵染宿主的过程中起着重要的粘附作用,并且是不同血清型嗜水气单胞菌的共同保护性抗原。本研究在克隆了嗜水气单胞菌外膜蛋白A基因的基础上,分别将其在大肠杆菌和乳酸乳球菌表达系统中表达,并分析了阳性表达菌作为活载体口服疫苗对小鼠的保护效（本文此处忽略..）果,获得如下主要结果：1)根据发表的嗜水气单胞菌外膜蛋白A基因序列(登陆号AF146597)设计了一对引物,以本实验室保存的强毒力嗜水气单胞菌基因组为模板,通过PCR扩增出嗜水气单胞菌外膜蛋白A基因(ompA),并经T／A克隆插入到pUCm-T载体上,获得了含有ompA的重组克隆质粒pUCm-T-omp。序列分析结果表明,外膜蛋白A基因全长为1020bp,编码339个氨基酸,理论分子量为35.9kDa,其中N端前23个氨基酸为信号肽,成熟肽由316个氨基酸组成,理论分子量为33.7kDa,其DNA序列与AF146597的同源性为87.24%,氨基酸序列的同源性为89.2%。2)分别根据去除信号肽基（本文此处忽略..）因和带有信号肽基因的ompA基因序列设计其在大肠杆菌中表达的引物,并分别引入了如下酶切位点：SalI/XhoI、EcoRI/XhoI。分别将ompA基因定向插入到大肠杆菌融合表达载体pET-30a,经转化和筛选分别获得了含重组表达质粒pET-omp1和pET-omp2的阳性表达菌E.coli[pET-omp1](含有信号肽)和E.coli[pET-omp2](不含信号肽)。SDS-PAGE电泳显示,外膜蛋白在大肠杆菌中成功表达。3)根据测定的ompA序列,设计其在乳酸乳球菌中表达的引物,并分别在5’端和3’端引入BamHI和XbaⅠ（此处忽略..）酶切位点。并定向插入乳酸乳球菌分泌表达载体pNZ8048,转化中间宿主E.coliMC1061筛选阳性菌。提取重组表达质粒pNZ8048-omp并电击转化乳酸乳球菌,通过PCR鉴定获得阳性基因工程菌L.lactis[pNZ-omp]。但因表达量低,SDS-PAGE电泳检测到很淡的目的条带。4)将120只BALB／c小鼠分成6个组,分别在试验第1、2、3天和第20、21、22天进行口服免疫PBS、E.coli[pET]、E.coli[pET-omp1]、E.coli[pET-omp2]、L.lactis[pNZ]和L.lactis[pNZ-omp]菌(0.2m1),第40天用嗜（此处忽略..）水气单胞菌进行攻毒试验以评价活重组菌的免疫保护效果。结果发现：L.lactis[pNZ-omp]组、E.coli[pET-omp1]组、E.coli[pET-omp2]组小鼠的存活率分别为90%,80%,60%；而对照组小鼠的存活率仅为20%。以上结果表明,乳酸乳球菌重组活载体疫苗具有较好的免疫保护效果。

以上为本篇毕业论文范文嗜水气单胞菌外膜蛋白基因工程活载体疫苗的制备及其对小鼠免疫效果的研究的介绍部分。

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