布氏杆菌L7/L12和OMP31基因克隆及其融合蛋白免疫原性研究

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布氏杆菌L7/L12和OMP31基因克隆及其融合蛋白免疫原性研究

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布氏杆菌L7/L12和OMP31基因克隆及其融合蛋白免疫原性研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：布氏菌病(Brucellosis)是由布氏杆菌(Brucella.spp)引起的人畜共患病,布氏杆菌病主要造成波状热和慢性感染,引起流产和不孕不育。目前已经有大约170个国家和地区存在和流行,给群众的健康和养殖业的发展带来了极大的危害。预防并控制甚至根除布氏杆菌病已经成了当务之急。而目前使用的弱毒疫苗(牛型S19和羊Rev.1)对预防布氏杆菌病能够起到一定作用（略..）,但却因为不安全和难以鉴别以及接种途径不方便而困扰着所有布氏杆菌疫苗研究者。随着分子生物学技术的进步,布氏杆菌全基因测序工作完成,几种主要的保护性抗原和毒力相关基因的生物学特征被揭示,如核糖体蛋白L7/L12,外膜蛋白OMP31,P39,毒力相关基因LPS相关的Pmm基因、wboA基因、pgm基因等。目前研究者利用基因工程疫苗技术,构建DNA疫苗和重（此处忽略..）组亚单位疫苗,有望能够开发出一种有效安全的布氏杆菌疫苗。本研究根据已经发表的布氏杆菌基因序列,选择种间序列极为保守的保护性抗原L7/L12,OMP31基因,依此进行PCR扩增,利用引物上设计好的限制性内切酶酶切位点进行基因重组,克隆到已经构建好的表达载体上,经过PCR检测,限制性内切酶酶切鉴定和测序分析,得到了正确的重组,并构建了PME290-SDLO（文章此处忽略..）mp高效表达载体,将构建好的表达载体转化绿脓杆菌(PAK/2pfs),通过培养得到了表达产物,对表达产物进行SDS-PAGE和WesternBlot鉴定,结果符合预期。用分子生物学软件DNASTAR7.1对重组蛋白进行了分析,结果显示该基因编码的蛋白具有很好的亲水性。经融合蛋白动物免疫试验,结果表明该重组载体表达的L7-OMP31融合蛋白具有很好的免疫（此处忽略..）原性,同时将L7/L12基因克隆至pSTV29表达载体,转化大肠杆菌BL21感受态,并经IPTG诱导表达出L7/L12蛋白,为L7/L12-OMP31融合蛋白的鉴定提供了检测抗原。本项研究为进一步开展布氏杆菌亚单位疫苗的研制和布氏杆菌病的检测技术研究奠定了前期基础。

以上为本篇毕业论文范文布氏杆菌L7/L12和OMP31基因克隆及其融合蛋白免疫原性研究的介绍部分。

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