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NIDD、CAPON、Dexras1等nNOS相关分子在大鼠坐骨神经损伤及炎性疼

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毕业论文范文题目：NIDD、CAPON、Dexras1等nNOS相关分子在大鼠坐骨神经损伤及炎性疼，论文范文关键词：NIDD、CAPON、Dexras1等nNOS相关分子在大鼠坐骨神经损伤及炎性疼
NIDD、CAPON、Dexras1等nNOS相关分子在大鼠坐骨神经损伤及炎性疼毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:观察NIDD、CAPON、Dexras1等nNOS相关分子mRNA在大鼠坐骨神经损伤及完全弗氏佐剂(CFA)致炎疼痛模型中的表达情况,探讨其在外周神经损伤与修复、神经元存活与死亡、失神经支配骨骼肌再生修复以及痛觉传递与调制等过程中的生物学作用。方法:首先通过引物设计、RT-PCR、T-A克隆、体外转录、斑点杂交等方法成功获取NIDD、CAPON、Dexras1和nNOSTaqMan探针与cRNA探针;然后分别制备大鼠坐骨神经切断与夹伤模型,利用实时荧光定量PCR与原位杂交技术观察上述分子mRNA在损伤神经、相应背根神经结(DRG)及脊髓中的表达变化、组织分布与细胞定位;而后在荧光定量PCR与原位杂交基础上,结合足迹试验、Westernblot、H-E染色、Masson染色、NADPH-d组织化学、免疫荧光、免疫共沉淀等技术观察CAPON与NOS在神经夹伤后相应腓肠肌中的表达变化与相互作用情况并分析其意义;此外,制备完全弗氏佐剂(CFA)炎性疼痛模型,检测辐射热刺激痛行为学改变,并观察NIDD、CAPON、Dexras1与nNOSmRNA在相应背根神经结(DRG)及脊（本文此处忽略..）髓中的表达变化。结果:(1)实时荧光定量PCR各个质粒标准曲线各参数理想,各梯度之间间隔的Ct值相等,相关系数R在0.99以上,反应效率接近1.0,各点变异系数小于10%;地高辛标记的cRNA探针经敏感度测试浓度较高,均接近50ng/μl。(2)NIDD、CAPON、Dexras1及nNOSmRNA在正常大鼠坐骨神经、DRG及脊髓中均有表达,且在脊髓中相对较高。在单侧坐骨神经切断后,这些分子均发生了动态的表达变化,表现为在某些时间点内短暂上调。在切断神经近、远侧断端中,伤后1w为各个分子的表达高峰,增高的mRNA均主要位于增殖的雪旺细胞中。在伤侧相应DRG(L4-L6)中,NIDD、CAPON、Dexras1和nNOSmRNA分别在伤后2d、2d、2w及1d出现表达高峰,增高的mRNA主要位于神经元细胞中,少量存在于卫星细胞。在相应脊髓节段中,伤后1w仍是各个分子的表达高峰,增高的mRNA主要分布于双侧脊髓后角;在双侧前角亦有较多表达。这些分子增高的mRNA均主要由神经元表达,少量由胶质细胞表达。(3)NIDD、CAPON、Dexras1及nNOSmRNA在大鼠单侧坐骨神经夹伤后也出现了表达变化。在夹伤神经中,伤（文章此处忽略..）后2w是各个分子的表达高峰,增高的mRNA均主要分布于夹伤处近侧段增殖的雪旺细胞中。在伤侧相应DRG(L4-L6)中,各个分子mRNA均在伤后2w出现表达高峰,增高的mRNA亦主要位于神经元细胞中,少量存在于卫星细胞。在相应脊髓节段中,伤后1w是除nNOS外各个分子的表达高峰,增高的mRNA亦主要分布于双侧脊髓后角;在双侧前角亦有较多表达。这些分子增高的mRNA均主要由神经元表达,少量由胶质细胞表达。而nNOSmRNA在伤后下调,1w达到其表达低谷,4w时恢复正常。(4)在坐骨神经夹伤后,相应腓肠肌因失神经支配发生萎缩,但同时其中肌卫星细胞被激活,肌肉发生再生修复。在此过程中,CAPON与三种NOS亚型即nNOS、eNOS及iNOS,均发生了变化。CAPONmRNA及蛋白水平在伤后早期均开始上调,在1d左右达到高峰,之后其mRNA在4w时又出现明显增加,而蛋白呈持续高表达状态。此外,CAPONmRNA与蛋白均在活化的肌卫星细胞或新生肌管中有大量表达。nNOSmRNA与蛋白水平在伤后即出现下调,在1d左右达到低谷,之后逐渐恢复至基础水平。在活化的肌卫星细胞或新生肌管中也检测到一定量（本文此处忽略..）的nNOSmRNA或蛋白表达。eNOS蛋白在这一过程中基本呈持续增加,而iNOS出现两次表达高峰,一次在早期6h,另一次从2w开始。eNOS与iNOS均被发现有少量存在于Myf-5阳性的肌卫星细胞或新生肌管中。免疫共沉淀显示,CAPON与nNOS在体内存在相互作用,而eNOS或iNOS与CAPON之间没有检测到共沉淀现象。(5)在CFA单侧爪底注射后,引起了大鼠同侧热痛觉过敏,以4–6h最明显,持续至72h。而在对侧或NS组并未出现相同现象。在该炎性疼痛模型中,nNOSmRNA水平在同侧DRG中1h时就显著升高,12–72h呈持续高水平状态,其中24h为其表达最高峰。在脊髓腰膨大中nNOSmRNA在4h出现短暂上调,在48–72h时表达再次显著增高。NIDDmRNA在同侧DRG中24h出现表达高峰;在脊髓腰膨大中从24h时显著上调,并一直持续至72h。此外,形态学研究显示其分布在与痛觉传递密切相关的细胞亚群,即在DRG中与许多IB4阳性的细胞有共定位,在脊髓中集中分布于后角接受伤害性和热感受性传入的区域板层(Ⅰ、Ⅱ层)。CAPONmRNA在同侧DRG中1h就出现了明显下调,并且呈降低状态持续至72h;在脊髓腰膨大中1h（此处忽略..）出现了降低,在4h轻微短暂的回升之后,从6h起再次显著下降,并持续至48h,但在72h时基本恢复正常。Dexras1mRNA在同侧DRG中1h即出现显著上调,除4h有一轻微的回跌外,基本上处于升高状态持续至72h;在脊髓腰膨大中1h就出现了短暂的降低,在4h短暂的回升之后,于6–12h期间均再次显著下降,24h起基本恢复正常。结论:(1)NIDD、CAPON、Dexras1及nNOS可能影响周围神经损伤后的再生过程以及由周围神经损伤引起的相应DRG或脊髓中神经元的存活或死亡,并且可能参与痛觉传递和(或)调制过程。(2)CAPON与三种NOS亚型可能在骨骼肌失神经支配后肌卫星细胞活化与再生修复过程中发挥重要作用。(3)NIDD、CAPON、Dexras1及nNOS在CFA所致大鼠炎性疼痛模型中,可能参与其痛觉信息的传递或调制过程以及与疼痛的发生和(或)维持有关。

以上为本篇毕业论文范文NIDD、CAPON、Dexras1等nNOS相关分子在大鼠坐骨神经损伤及炎性疼的介绍部分。

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